Seleção de linhagens de Aedes aegypti com alterações genéticas relacionadas à resistência a inseticidas

Abstract

O controle do Aedes aegypti, mosquito transmissor dos arbovírus dengue, Zika e chikungunya no Brasil, é em grande parte feito pelo uso de inseticidas. No entanto, o uso exacerbado desses compostos tem selecionado populações resistentes do mosquito em escala global. Conhecer as bases moleculares da resistência a inseticidas é uma estratégia importante para melhorar o conhecimento acerca desse fenômeno evolutivo, bem como para orientar ações que evitem sua disseminação. Neste estudo, selecionamos linhagens de Ae. aegypti com diferentes marcadores moleculares para a resistência, em mecanismos de mutação no sítio alvo de inseticidas (mutações kdr no gene do canal de sódio regulado por voltagem), alteração nos níveis de expressão de genes relacionados à detoxificação (genes de monoxigenase P450 e carboxilesterase) e à quimiopercepção (um pressuposto gene sensorial). Para tanto, utilizamos Linhagens Endogâmicas Recombinantes (LERs) de Ae. aegypti, em construção, que foram primeiramente genotipadas via qPCR TaqMan para identificação de presença ou ausência de alelo kdr. Estabelecemos sublinhagens chamadas SS a partir das LERs sem kdr. A partir das LERs heterozigotas para a mutação, obtivemos pares de sublinhagens com e sem kdr, a partir da mesma LER, sendo as sublinhagens kdr homozigotas para os alelos R1 ou R2. Estabelecidas as linhagens, via RT-qPCR avaliamos a expressão, em larvas L3 e fêmeas adultas, dos genes CYP6BB2, CYP9J10, CYP9J28 e CYP9M6 (P450), CCEae3a (carboxilesterase) e AAEL002022 (homólogo ao gene SAP2 de Anopheles gambiae), adotando-se o gene RpS14 como controle endógeno e a linhagem Rockefeller como referência. Selecionamos cinco sublinhagens homozigotas sem kdr (17-SS, 235-SS, 25-SS, 242-SS e 19-SS) e três sublinhagens homozigotas com kdr (25-R1R1, 242-R1R1 e 19-R2R2). Os níveis de expressão destes genes variaram entre as sublinhagens, e no geral mantiveram perfis de sub ou superexpressão em larvas e adultos da mesma sublinhagem. Entre os principais destaques de superexpressão, citam-se CCEae3a em larvas de 19-R2R2 (23,3X), CYP6BB2 em adultos de 235-SS (9,7X) e 242-SS (15,1X), e CYP9J28 em larvas de 19-R2R2 (10,5X); e de subexpressão: CYP9J28 em larvas de 25-R1R1 (-15,8X) e AAEL002022 em adultos de 17-SS (-7,3X), 242-R1R1 (-8,6X) e 19-R2R2 (-9,9X). A manutenção dessas sublinhagens permitirá a realização de bioensaios para a associação desses mecanismos conhecidos, isoladamente ou em conjunto, bem como para a avaliação de seus efeitos na tabela de vida do inseto.