Caracterização da atividade plasmodicida de fosfolipases básicas do veneno de Bothrops jararacuçu

Abstract

A malária é uma doença endêmica em países subdesenvolvidos causada por parasitos do gênero Plasmodium. Anualmente, milhares de pessoas são infectadas e muitas dessas vão ao óbito em decorrência de complicações causadas por esta patologia. Adicionalmente, as alternativas terapêuticas são limitadas, o que ressalta a importância da prospecção de novas biomoléculas que apresentem eficácia para o tratamento desta doença. O objetivo do presente trabalho foi isolar e purificar duas fospolipases A2 básicas do veneno da serpente Bothrops jararacussu, sendo elas a BthTX I e II. A purificação das PLA2s foi realizada em 2 etapas cromatográficas, sendo a primeira, cromatografia de troca iônica em resina CM-Sepharose, seguida por cromatografia de fase reversa em coluna C-18. Na primeira etapa, extraiu-se as frações básicas de interesse e estas foram novamente submetidas a cromatografia de fase reversa. O ensaio de SDS-PAGE revelou proteínas com a massa molecular aparente de 15 kDa, compatível com as fosfolipases A2 de serpentes. A atividade enzimática foi avaliada utilizando-se o substrato cromogênico 4N3OBA, demonstrando que a BthTX II é uma fosfolipase A2 enzimaticamente ativa. Em seguida, o potencial antiparasitário das PLA2s isoladas foi avaliado in vitro contra formas intraeritrocíticas de Plasmodium falciparum pelo método de Sybr green e o ensaio de citotoxicidade foi realizado contra células THP-1 e HepG2 pelo método de MTT. Os resultados de inibição antiparasitária frente a P. falciparum das PLA2 não apresentaram inibição na maior concentração testada (IC50>100 μg/mL). Ao avaliar a citotoxicidade frente às linhagens HepG2 e THP-1 observou-se que as moléculas não apresentam citotoxicidade. Os resultados do trabalho, mostram que as metodologias utilizadas para o fracionamento e purificação das moléculas foram eficazes. Quanto a atividade biológica, as duas fosfolipases A2 necessitam de uma quantidade acima de (100 μg/mL) para atingirem o (IC50), quando comparado a outros resultados da literatura com moléculas de venenos de serpentes, esta concentração pode ser considerada moderadamente alta. Como conclusão, temos as duas proteínas básicas fosfolipase A2, BthTX-I e BthTX-II isoladas em elevado grau de pureza, e uma alternativa para melhorar a especificidade da atividade destas moléculas, seria fazer um desenho racional de peptídeos provenientes destas moléculas.