Sequência de direcionamento nuclear em GP63 de Leishmania (Viannia) braziliensis

Abstract

Leishmania (Viannia) braziliensis é o principal agente etiológico da Leishmaniose Tegumentar no Brasil. Esta espécie apresenta fatores de virulência, como as proteases, que possuem funções significativas em uma ampla gama de processos biológicos no ciclo de vida do parasito. O trabalho que ora se apresenta tem como foco a Glicoproteína de 63 kilodalton (GP63), uma metaloprotease zinco-dependente que se destaca como importante fator de virulência em Leishmania (Viannia) braziliensis. Isoformas desta protease estão envolvidas na alteração da função de fatores de transcrição no núcleo de célula hospedeira por meio de clivagem proteolítica, indicando seu potencial de interferirem na ativação de vias de sinalização de mecanismos de defesa do hospedeiro e de influenciarem na performance do parasito. Portanto, o estudo foi conduzido por abordagens in silico para identificar, mapear e caracterizar isoformas de GP63 que apresentem Sinais de Localização Nuclear (Nuclear Localization Signal - NLS) depositadas em banco de dados e in vitro para provar a presença de transcritos destes genes em formas promastigotas e amastigotas axênicas do parasito. Os resultados de busca em banco de dados e análises de alinhamento múltiplo evidenciaram que das sequências (n=30) de GP63 do cromossomo 10, cerca 40 % (n=12) contém sequência semelhante a um NLS não convencional. Cerca de 85% a 100% de identidade foi constatado para o conjunto de estruturas primárias destas sequências. Os modelos tridimensionais desenvolvidos com as isoformas da GP63 de L. (V.) braziliensis apresentaram 71% de identidade com a estrutura molde, os quais foram concordantes quanto a localização na superfície dos resíduos NLS que apresentaram cargas negativas e neutras. A presença de transcritos para estes genes foi avaliada em ensaios de expressão gênica, usando pares de iniciadores oligonucleotídeos específicos. Os níveis de expressão relativa (RQ) dos transcritos dos genes de GP63 avaliados indicaram aumento em amastigotas axênicas quando comparados com as formas promastigotas: LbrM.10.0530 (RQ = 3,269), LbrM.10.1690 (RQ = 2,637), LbrM.10.1580 (RQ = 2,958), LbrM.10.0510 (RQ = 3,189) LbrM.10.0580 (RQ = 10,32) e LbrM.10.1700 (RQ = 2,578). O conjunto de resultados aqui apresentados relatam pela primeira vez o potencial da GP63 com regiões semelhantes ao NLS de serem expressas por L. (V.) braziliensis.