Subpopulações de Leishmania (Viannia) braziliensis (MCAN/BR/1998/R619): contribuição ao perfil de virulência do parasito

Abstract

Este trabalho aborda a contribuição de subpopulações da L. (V.) braziliensis cepa Thor (MCAN/BR/1998/R619) na composição do perfil de virulência deste parasito. O estudo foi realizado in vitro com subpopulações com perfil de infectividade descritos como tendo alta (Thor03 e Thor10) e baixa (Thor22) taxa de infectividade em macrófagos murinos. Na primeira etapa deste estudo, o impacto de combinações binárias dos parasitos na infecção de macrófagos murinos foi investigado, com base no índice endocítico (IE) às 24 horas de infecção. Na presença de Thor10, o IE do Thor22 aumenta em comparação com o IE das combinações Thor03/Thor22 nas mesmas proporções. O potencial das subpopulações, isoladamente ou em combinações, para modular a expressão de citocinas e óxido nítrico também foi avaliado. Níveis baixos de NO e TNF-α foram encontrados em ensaios com combinações Thor10/Thor22 em comparação as subpopulações isoladas. Em contraste, os ensaios com combinações Thor03/Thor22 aumentaram a produção de IL-10. Na segunda etapa deste estudo, as subpopulações foram avaliadas quanto a possíveis descritores fenotípicos, com foco nos fatores de virulência (calpaínas; subtilisina; cisteína protease B - CPB; oligopeptidase B - OPB; tripanotiona redutase - TR; triparedoxina peroxidase - TXNPx) e ao estresse oxidativo induzido por hidroperóxido de terc-butila (tBOOH) e peróxido de hidrogênio (H2O2). A abordagem de quantificação relativa para os genes da calpaína, CPB e subtilisina protease não mostra diferenças significativas entre as subpopulações. Por outro lado, as proteínas subtilisina e CPB foram identificadas como mais abundantes em Thor03 pela técnica de citometria de fluxo marcada com fluorescência. Ensaios de Western blotting indicaram predominância das proteínas subtilisina (110 a 50 kDa) e CPB (40 a 18 kDa) no extrato de amastigotas intracelulares das subpopulações Thor03 e Thor10. A atividade de TR em amastigotas intracelulares Thor10 e ensaios de suscetibilidade a agentes indutores de H2O2 e doadores de NO indicaram maior resistência à indução de estresse oxidativo pelos promastigotas Thor10, seguidos pelos promastigotas Thor03. Coletivamente, esses resultados fornecem evidências in vitro sobre o potencial da estrutura populacional de L. (V.) braziliensis em desempenhar um papel relevante na infecção do hospedeiro por este parasito. Os fatores de virulência e mecanismos antimicrobianos de macrófagos aqui explorados sugerem como múltiplas subpopulações fenotípicas podem contribuir para a adaptabilidade de uma cepa de L. (V.) braziliensis durante infecção em células hospedeiras.