Estudo da participação dos fibrócitos na infecção por Leishmania (L.) amazonensis, nos sistemas in vivo e in vitro

Abstract

Os fibrócitos foram identificados em estudos de cura de lesões, através da análise do exsudato inflamatório na derme de camundongos, indicando uma origem hematopoiética e capacidade de produzir matriz extracelular. Estudos associam fibrócitos a algumas patologias como: fibrose pulmonar, asma, infecções por Schistosoma sp. in vivo e Borelliae burgdorferi in vitro. A participação destas células na resposta imune induzida por protozoários do gênero Leishmania foi sugerida, entretanto não há estudos que comprovem esta relação. Com base nestes fatos, os objetivos deste estudo foram: estudar, in vivo, a participação dos fibrócitos na resposta inflamatória durante os momentos iniciais da infecção de camundongos BALB/c inoculados com promastigotas de L. (L.) amazonensis e, in vitro, a interação dos fibrócitos com este parasito. A presença dos fibrócitos na derme foi avaliada através de análises fenotípicas em cortes congelados da orelha dos camundongos infectados ou não com L. (L.) amazonensis, foram utilizadas imunomarcações com anticorpo anti-CD45 e anti-HSP47. Nos controles, somente foram detectados fibrócitos (CD45⁺/HSP47⁺) na pele íntegra, por citometria de fluxo. Um aumento expressivo do número de fibrócitos foi observado, após 15 dias de infecção, tanto por imunofluorescência quanto por citometria de fluxo. A análise do percentual de fibrócitos produtores de citocinas mostrou que estas células são capazes de produzir citocinas pró e anti-inflamatórias e que estas são moduladas pela presença dos parasitos. Após 15 dias de infecção, não houve alteração no percentual de fibrócitos produtores de INF-γ, entretanto, reduziu o número de fibrócitos capazes de produzir IL-12 e TNF-α, quando comparados aos controles. Por outro lado, foram detectados um expressivo aumento do percentual de fibrócitos produtores de IL-10 e a diminuição do percentual de fibrócitos produtores de TGF-β na derme infectada. A fim de estudar a interação dos fibrócitos com a L. (L.) amazonensis, in vitro, culturas primárias de fibrócitos, obtidos de sangue periférico de camundongos BALB/c, foram estabelecidas e cultivadas por 20 dias a 37℃ / 5% de CO₂ suplementado com 0,15% de L-glutamina. A análise fenotípica revelou que 100% das células foram identificadas como fibrócitos (CD45⁺/HSP47⁺). A avaliação da interação destas células com a L. (L.) amazonensis demonstrou que os fibrócitos endocitaram e destruíram rapidamente os parasitos, após 72 horas de infecção. A análise ultraestrutural dos fibrócitos infectados revelou a presença de material elétron-denso no interior dos vacúolos parasitóforos, provavelmente de origem lisossomal. Além disso, a avaliação da produção de nitrito, pelo método de Griess, revelou que os fibrócitos infectados produziram altas taxas de óxido nítrico nas duas primeiras horas de interação, sugerindo a participação desta molécula na morte dos parasitos. Estes resultados nos permitem sugerir que os fibrócitos podem apresentar um papel importante na modulação e no direcionamento da resposta inflamatória inicial causada pela L. (L.) amazonensis na derme dos camundongos BALB/c.