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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/68977
ESTUDO DE MOLIBDATO DE PRATA (AG2MOO4) COMO ALTERNATIVA PROMISSORA PARA COMBATER AS INFECÇÕES POR ESCHERICHIA COLI E PSEUDOMONAS AERUGINOSA: ABORDAGEM ANTIMICROBIANA, ANTIBIOFILME E CITOTÓXICA
Escherichia coli;
Pseudomonas aeruginosa;
Mecanismos de ação;
Viabilidade;
Toxicidade.
Escherichia coli;
Pseudomonas aeruginosa;
Mechanisms of action;
Viability;
Toxicity.
Xavier, Ana Carolina Moura | Date Issued:
2025
Author
Advisor
Co-advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Leônidas & Maria Deane. Manaus, AM, Brasil.
Abstract in Portuguese
Desde a introdução dos antibióticos, a resistência tem se tornado um problema grave de saúde pública principalmente nas instalações nosocomiais. Esse evento torna-se mais desafiador quando direcionado a bactérias que segundo a Organização Mundial de Saúde (OMS) são de importância clínica como Pseudomonas aeruginosa e Escherichia coli. Essas estirpes têm desenvolvido resistência a antibióticos de amplo espectro, sendo caracterizadas como uma crescente ameaça, tornando-se necessário a busca por novas substâncias que visem controlar a disseminação dessas cepas. Nesse sentido, semicondutores compostos por prata (Ag) têm sido explorados por pesquisadores, destacando-se o molibdato de prata (Ag2MoO4), que é uma substância com polimorfismo estrutural e com diversas aplicabilidades inclusive antibacteriana. Assim, o trabalho possui como objetivo geral investigar o potencial do molibdato de prata como alternativa promissora no combate às infecções causada por Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, avaliando suas propriedades antimicrobianas, antibiofilme e citotóxicas. Através do método de viabilidade celular, verificou-se a toxicidade desse composto frente a linhagem epitelial renal derivada de rim de macaco (VERO) e célula de fibroblasto do pulmão humano (MRC5) em três períodos de 24, 48 e 72 h, realizando em cada período a leitura em três tempos distintos: 1, 2 e 3 h. A atividade antibacteriana do Ag2MoO4 foi avaliada pelos métodos de difusão em ágar e concentração inibitória mínima (MIC) com posterior aplicação do teste microbicida e microbiostático seguido da atividade antibiofilme. Por fim, realizou-se a análise da estrutura bacteriana tratada com Ag2MoO4, através da Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). A atividade antibacteriana do Ag2MoO4 contra as espécies de E. coli e P. aeruginosa apresentaram a média de halos de 19,06 ± 0,5 a 18,3 ± 0,57, obtendo o MIC de 125 a 250 µg/ml. O teste microbicida e
microbiostática mostrou que em 2 horas o Ag2MoO4 reduziu a 0 log (UFC/mL) as respectivas cepas, mantendo-se o resultado ao longo de 50 horas. Já o teste antibiofilme, mostrou a capacidade do A2MoO4 em inibir a formação da matriz polimérica, alcançado a densidade óptica (DO) de 0,0921 para P. aeruginosa, 0,1656 para EIEC e 0,1785 para EHEC mostrando menor crescimento em relação ao controle de biofilme. A ação promissora do Ag2MoO4 foi confirmada pela MEV, mostrando através do imageamento a redução da densidade bacteriana e o murchamento da EHEC, bem como o rompimento na região central da EIEC resultando em fragmentos da cepa, além de aglomerados bacterianos murchos, definhados e rompidos da P. aeruginosa. Quando verificado a toxicidade contra as linhagens, observou-se para VERO o melhor IC50 na análise de 24 horas, na leitura de 3 horas (161,4 µg/mL) enquanto para a MRC5 o melhor IC50 foi em 72 horas na leitura de 3 horas (88,04 µg/mL), a correlação dos resultados com a MIC de 125 µg/mL mostra menor toxicidade para a célula VERO. Os resultados obtidos mostram a importância de explorar as propriedades dessa substância contra as cepas em estudo, tendo em vista, a facilidade de adaptação desses patógenos contra as terapias atuais e a necessidade da busca de novas substância que dificultam o desenvolvimento da resistência. Isso se torna mais promissor, por se tratar de cepas de importância clínica como P. aeruginosa que possui um arsenal de mecanismos de resistência e E. coli que tem expandido cepas resistentes da comunidade para o âmbito hospitalar.
Abstract
Since the introduction of antibiotics, resistance has become a serious public health problem, especially in hospital settings. This event becomes more challenging when directed at bacteria that, according to the World Health Organization (WHO), are of clinical importance, such as
Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli. These strains have developed resistance to broad-spectrum antibiotics, being characterized as a growing threat, making it necessary to search for new substances that aim to control the spread of these strains. In this sense, semiconductors composed of silver (Ag) have been explored by researchers, highlighting silver molybdate (Ag₂MoO₄), which is a substance with structural polymorphism and with several applications, including antibacterial. Thus, the work has as its general objective the study of silver molybdate as a promising alternative to combat infections by Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa: an antimicrobial, antibiofilm, and cytotoxic approach. Through the cell viability method, the toxicity of this compound against the renal epithelial cell line derived from monkey kidney (VERO) and human lung fibroblast cell (MRC5) was verified in three periods of 24, 48, and 72 h, taking readings at three different times in each period: 1, 2, and 3h. The antibacterial activity of Ag₂MoO₄ was evaluated by the agar diffusion and minimum inhibitory concentration (MIC) methods with subsequent application of the microbicidal and microbiostatic test followed by the antibiofilm activity. Finally, the analysis of the bacterial structure treated with Ag₂MoO₄ was performed through Scanning Electron Microscopy (SEM). The antibacterial activity of Ag₂MoO₄ against E. coli and P. aeruginosa species showed a mean halo of 19.06 ± 0.5 to 18.3 ± 0.57, obtaining the MIC of 125 to 250 µg/ml. The microbicidal and microbiostatic test showed that in 2 hours Ag₂MoO₄ reduced the respective strains to 0 log (CFU/mL), maintaining the result over 50 hours. The antibiofilm test showed the ability of Ag2MoO4 to inhibit the formation of the polymeric matrix, reaching an optical density (OD) of 0.0921 for P. aeruginosa, 0.1656 for EIEC, and 0.1785 for EHEC, showing lower growth in relation to the biofilm control. The promising action of Ag₂MoO₄ was confirmed by SEM, showing through imaging the reduction of bacterial density and wilting of EHEC, as well as the rupture in the central region of EIEC resulting in fragments of the strain, in addition to wilted, withered, and ruptured bacterial clusters of P. aeruginosa. When verifying the toxicity against
the strains, the best IC50 was observed for VERO in the 24-hour analysis, in the 3-hour reading (161.4 µg/mL), while for MRC5 the best IC50 was in 72 hours in the 3-hour reading (88.04 µg/mL); the correlation of the results with the MIC of 125 µg/mL shows lower toxicity for the
VERO cell. The results obtained show the importance of exploring the properties of this substance against the strains under study, given the ease with which these pathogens adapt to current therapies and the need to search for new substances that hinder the development
of resistance. This becomes more promising since these are strains of clinical importance, such as P. aeruginosa, which has an arsenal of resistance mechanisms, and E. coli, which has expanded resistant strains from the community to the hospital environment.
Keywords in Portuguese
Molibdato de prata;Escherichia coli;
Pseudomonas aeruginosa;
Mecanismos de ação;
Viabilidade;
Toxicidade.
Keywords
Silver molybdate;Escherichia coli;
Pseudomonas aeruginosa;
Mechanisms of action;
Viability;
Toxicity.
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