Caracterização fenotípica e molecular da resistência microbiana em isolados de Klebsiella spp. provenientes de Unidades de Terapia Intensiva de Porto Velho/RO

Abstract

As infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS) são consideradas o evento adverso que frequentemente ameaçam a segurança dos pacientes, com risco significativamente maior nas Unidades de Terapia Intensiva (UTI). Entre os patógenos isolados, encontra-se Klebsiella spp., uma bactéria Gram-negativa, que tem desenvolvido resistência aos antimicrobianos através de vários mecanismos. Este estudo objetivou realizar a caracterização fenotípica e molecular da resistência microbiana em isolados de Klebsiella spp. provenientes de amostras clínicas de pacientes, profissionais da saúde e superfícies hospitalares de UTIs em Porto Velho, Rondônia. As coletas foram realizadas entre os meses de dezembro/2017 a fevereiro/2018, dezembro/2018 a janeiro/2019 e novembro de 2020, em UTIs de três hospitais da rede pública de Porto Velho. A identificação bacteriana foi feita por PCR e sequenciamento do gene 16S (rRNA). A suscetibilidade aos antimicrobianos foi avaliada por disco-difusão e microdiluição em caldo. A formação de biofilme foi analisada por ensaios de aderência em placas de microtitulação. A produção fenotípica de βlactamases de espectro estendido (ESBL) e de carbapenemases foi realizada pelo teste de aproximação de discos e disco combinado. A pesquisa dos genes de resistência foi feita por PCR convencional. Os polimorfismos genéticos foram analisados por eletroforese de campo pulsado em gel de agarose (PFGE) e a análise filogenética através de MLST (Multilocus Sequencing Typing), em ambos os casos foram selecionados isolados de K. pneumoniae multirresistentes (MDR) e positivos para blaCTX-M. Do total de 1.511 bactérias, 14,9% (226/1.511) foram identificadas como Klebsiella spp., sendo 62,4% (141/226) obtidas de amostras de pacientes, 23,9% (54/226) de profissionais de saúde e 13,7% (31/226) de superfícies hospitalares. K. pneumoniae foi a espécie predominantemente encontrada em amostras de pacientes (78%) e superfícies hospitalares (90,3%) e K. aerogenes em profissionais intensivistas (38,9%). A axila (43,3%), cavidade bucal (42,6%), cavidade nasal (70,4%) e aparelhos de ventilação mecânica (19,4%) foram os locais de coleta com maior frequência de isolamento. Klebsiella spp. obtidas de pacientes hospitalizados e de superfícies hospitalares mostraram altos percentuais de resistência (>50%) aos antibióticos cefuroxima, cefotaxima, ceftriaxona, ciprofloxacina e aztreonam e elevada taxa de MDR, com maior suscetibilidade aos carbapenêmicos, amicacina e polimixina B. Bactérias oriundas de profissionais de saúde apresentaram baixos percentuais de resistência. A produção fenotípica de ESBL e carbapenemases foi detectada em 29% e 15% dos isolados, respectivamente. A formação de biofilme foi observada em 58,4% das bactérias. A positividade para os genes codificadores de ESBL foi de 95%, 75% e 70% para blaTEM, blaSHV e blaCTX-M, respectivamente. Não foi evidenciada a presença de genes blaNDM, blaOXA-48, blaIMP, blaVIIM, blaGES, blaSPM e mcr-1, havendo amplificação somente para blaKPC em 17% das amostras. Através do PFGE, foram identificados 33 grupos clonais (A-G1), sendo os grupos F e G com maior número de isolados. O MLST evidenciou a ocorrência de 18 Sequence Types (ST), sendo o ST629 o mais prevalente, seguido do ST11, ST15, ST307 e ST101. Quatro novos STs foram determinados. Os resutados do PFGE e MLST demonstraram que ocorreu a disseminação clonal de K. pneumoniae MDR nas UTIs de Porto Velho/RO. Esses achados enfatizam a necessidade do monitoramento constante da resistência antimicrobiana em âmbito hospitalar e a adoção de medidas para mitigação da propagação desses patógenos.