Análise in vitro da atividade antileishmania da silibinina em Leishmania infantum e in silico do seu possível mecanismo de ação na inibição da tripanotiona redutase

Abstract

A leishmaniose é uma doença negligenciada causada por parasitos do gênero Leishmania. As manifestações clínicas dependem da espécie e da resposta do hospedeiro perante a infecção, dentre estas, estão presentes a forma tegumentar, ocasionando lesões tegumentares ulceradas e nodulares, e a visceral que é a forma mais grave da doença, afetando órgãos como o baço, a medula óssea e o fígado. Os tratamentos utilizados na clínica incluem os antimoniais pentavalentes, a anfotericina B e a miltefosina, entre outros fármacos, porém, podem apresentar graves efeitos colaterais, casos de falha terapêutica e resistência aos fármacos antileishmania. Assim, existe a necessidade de desenvolvimento de novos tratamentos mais seguros, menos invasivos, de preferência administrados por via oral, e que sejam acessíveis à população. Em busca por novas alternativas terapêuticas os flavonoides demonstraram efeitos antiprotozoários. A silibinina é a flavonolignana mais abundante da planta Silybum marianum com efeitos antifúngicos, antitumoral e em tripanosomatídeos (T. brucei, L. major e T. cruzi). O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade da silibinina in vitro em promastigotas e amastigotas intracelulares de L. infantum, assim com determinar o seu mecanismo de ação e avaliar seus parâmetros de ADMET e Lipinski. A silibinina inibiu de maneira concentração-dependente a viabilidade celular de promastigotas de L. infantum demonstrando o IC₅₀ de 410µM. Também em promastigotas, na presença de concentrações crescentes de silibinina, observamos um aumento dos níveis de Espécies Reativas de Oxigênio (ROS) e uma redução da concentração de ATP intracelular. A silibinina demonstrou in silico, ser capaz de se ligar ao sítio catalítico da enzima Tripanotiona Redutase (TR) em ambos os estados de oxidação, tanto o reduzido (PDB: 4ADW) quanto o oxidado (PDB: 2JK6), interagindo com resíduos envolvidos com a tríade catalítica como, os resíduos His461 e Cys57 e com resíduos envolvidos com a interação do substrato (tripanotiona) como a Tyr110, Ser109, Ser14, Ser18, Leu17, Ser112 e Asp112. Em macrófagos peritoneais murinos a silibinina apresentou um CC₅₀ de 169,6µM, em seguida, analisamos a atividade da silibinina em amastigota intracelulares de L. infantum que demonstrou um IC₅₀ de 0,7µM obtendo um Índice de Seletividade (IS) de 242,3. Os parâmetros de Lipinski e ADMET da silibinina foram determinados pela plataforma pkCSM e swissADME. Nesta análise a molécula apresentou características de absorção e distribuição por via oral com baixa probabilidade de interação medicamentosa e toxicidade. Em conclusão, nossos dados sugerem que a silibinina apresenta efeito em promastigota e amastigota de L. infantum tendo como mecanismo de ação a inibição da TR, afetando o balanço-redox, conduzindo para o aumento dos níveis de ROS e reduzindo o ATP intracelular.