Avaliação do perfil de linfócitos e macrófagos exaustos nos modelos canino e murino de leishmaniose visceral

Abstract

A leishmaniose visceral (LV) é um importante problema de saúde pública e o baço tem sido descrito como um dos órgãos mais afetados. O cão é considerado um reservatório podendo apresentar infecção progressiva e alta carga parasitária em vários tecidos, em especial na derme, agindo como fonte de parasitos para o vetor. Enquanto que o modelo murino tem sido muito relevante no estudo das infecções com leishmania, visto que várias linhagens de camundongos reproduzem experimentalmente algumas características das manifestações clínicas observadas na doença humana. Um dos aspectos frequentemente observados na relação Leishmania-hospedeiro, é a diminuição da capacidade das células imunes de responder e controlar a infecção nos casos de doença progressiva e isto pode estar relacionado ao processo de exaustão celular. Assim, este estudo tem como objetivo avaliar a expressão dos diferentes marcadores de exaustão em linfócitos e macrófagos de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum e camundongos infectados com Leishmania donovani, correlacionando ativação celular, sintomatologia, desorganização da matriz extracelular esplênica, falha de resposta específica anti-Leishmania e o controle da carga parasitária na leishmaniose visceral. Cães e camundongos com LV foram incluídos neste estudo. Os animais foram avaliados clinicamente para classificação de escore clínico. A análise histopatológica foi realizada para avaliar a desorganização da polpa branca esplênica e qPCR para quantificar a carga parasitária. Foram detectadas células iNOS⁺, arginase-1⁺, STAT3-p⁺, manose⁺ e TGF-β⁺, demonstrando a participação tanto de M1 como de M2 na resposta à infecção. A proporção M1/M2 diminuiu nos animais que apresentavam mais sinais clínicos e alta carga parasitária. Também detectamos expressão significativa de PD-L1 em macrófagos no baço com polpa branca esplênica desorganizada e alta carga parasitária, um perfil de exaustão celular. Detectamos também a presença de macrófagos em exaustão no baço que expressam arginase e, in situ evidenciamos a presença de amastigotas no interior das células arginase positivas e negativas. Ainda, células CD14‾arginaseʰⁱᵍʰ foram detectadas no baço e seu papel na imunopatogenia da LVC ainda carece de esclarecimento. No modelo murino observamos aumento da carga parasitária no baço e no fígado ao longo da infecção por L. donovani. Também foi evidenciado um aumento significativo da expressão de PD-L1 em monócitos, monócitos inflamatórios e em células dendríticas. Assim como, maior expressão de PD-1⁺, PD-1⁺TIM-3⁺ e CTLA-4⁺TIM-3⁺ em linfócitos T CD4 e CD8, principalmente com 28 dias de infecção e, significativo aumento de IFN-γ em linfócitos T CD4 após estimulação com BMDC no baço e no fígado dos camundongos infectados. Portanto, a manutenção de células M2 e exaustas em meio ao intenso infiltrado inflamatório no baço parasitado, associado à redução de células M1, poderia proporcionar locais seguros de replicação para o parasito, levando à persistência do parasito e à estimulação permanente da resposta inflamatória. A persistência do estímulo antigênico e inflamatório levaria à lesão crônica dos tecidos, que no baço é caracterizada pela desorganização da polpa branca esplênica, e agravamento da doença.