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Title: Marcadores circulantes de morte celular por apoptose em dengue
Advisor: Nogueira, Rita Maria Ribeiro
Members of the board: Pinheiro, Roberta Olmo
Brasil, Patrícia
Filippis, Ana Maria Bispo de
Lemos, Elba Regina Sampaio de
Pinto, Marcelo Alves
Authors: Limonta Velazquez, Daniel de Jesús
Coadvisor: Pinto, Luzia Maria de Oliveira
Coordinator: Moraes, Milton Ozório
Lima, Leila Mendonça
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil
Abstract: Dengue é a doença viral transmitida por mosquitos de maior importância mundial e é, causada por qualquer um dos quatro sorotipos do vírus (DENV-1,-2,-3,-4). É uma virose frequente em áreas tropicais e subtropicais e atualmente o Brasil notifica um número crescente de casos. Durante mais de 30 anos a dengue foi classificada em febre da dengue e febre hemorrágica da dengue. Porém, a OMS no ano 2009 propôs uma nova classificação: dengue com e sem sinais de alarme (DSSA e DCSA) e dengue grave (DG) no intuito de facilitar tanto o diagnóstico como o manejo do tratamento. A patogenia da dengue é multifatorial na qual se aceitam contribuições de fatores virais e do hospedeiro. Estudos sobre mecanismos da imunopatologia da dengue descreveram associações entre fenômenos descritos como “tempestade” de citocinas, hiperativação de células imunes, anticorpos e células T de reação cruzada entre diferentes sorotipos virais. Além disso, estudos vêm demonstrando a contribuição da apoptose na imunopatologia da dengue. Neste contexto, o objetivo do trabalho da tese foi avaliar o envolvimento de proteínas circulantes relacionadas a apoptose na patogênese da infecção pelos DENV. Para isso, 106 amostras foram obtidas de pacientes com suspeita clínica de infecção por DENV durante a epidemia de 2010 nos estados brasileiros de Mato Grosso do Sul e Rio de Janeiro. Para confirmação dos casos, cinco diferentes técnicas foram utilizadas: ELISA de captura de IgM, IgG anti-dengue, detecção da proteína viral NS1, isolamento viral e RT-PCR. Nesta casuística, 72 casos de dengue foram confirmados. A detecção de IgM anti-dengue confirmou um maior número de casos suspeitos. Os sorotipos encontrados foram DENV-1 e DENV-2. Baseado na nova classificação da OMS, tivemos 35 indivíduos com DSSA, 17 pacientes com DCSA e 15 indivíduos com DG. Contudo, a classificação tradicional da dengue diagnosticou apenas 5 casos com febre hemorrágica da dengue. Nos 67 pacientes da dengue foram dosados níveis plasmáticos de moléculas pró-apoptóticas (TNF-α, TRAIL, FasL) e anti-apoptótica (Survivina). Níveis aumentados de TNF-α, FasL e TRAIL foram encontrados nos pacientes com a forma DSSA quando comparados aos controles e pacientes graves (DG). Nossos resultados não indicaram correlações importantes entre os níveis de TNF-α e parâmetros associados à gravidade, mas, observamos correlações diretas entre FasL ou TRAIL com plaquetas e TRAIL com hematócrito. Todavia, o único caso fatal apresentou o maior nível plasmático de FasL. De forma interessante, TRAIL se correlacionou inversamente com a contagem dos linfócitos. Em relação à Survivina, os resultados indicaram que o grupo DCSA apresentou níveis diminuídos em comparação aos controles e pacientes graves e de forma interessante, Survivina se correlacionou diretamente com a contagem de leucócitos. Assim, o TRAIL seria indicador de bom prognóstico da doença, e TRAIL poderia estar envolvido com a maior susceptibilidade dos linfócitos à morte. Por outro lado, Survivina poderia estar participando da proliferação e/ou migração dos leucócitos. Até o presente, este é o primeiro trabalho abordando mediadores circulantes de apoptose segundo a nova classificação clínica da dengue. Mais pesquisas precisam ser realizadas para discernir a complexa interação entre moléculas pró e anti-apoptóticas e suas implicações na gravidade da dengue.
Abstract: Dengue is the most important viral disease transmitted by mosquitoes in the world, and is caused by any of the four dengue virus serotypes (DENV-1,-2,-3,-4). It is very common in the subtropical and tropical areas and currently Brazil is notifying an increasing number of cases. During more than thirty years dengue was classified in dengue fever and dengue hemorrhagic fever. However, in 2009 the WHO proposed a new dengue classification: dengue with and without warning signs and severe dengue to facilitate diagnosis and treatment management. The complex pathogenesis of dengue is multifactorial and it is accepted the contributions of viral and host factors. Studies on dengue immuno pathogenesis have described associations of the phenomenon described as cytokines storm, immune cells hyperactivation and cross-reacting T cells and antibodies with different DENV serotypes. Besides, a number of studies have been demonstrating the contribution of apoptosis to dengue immunopathology. In this context, the objective of the thesis work was to assess the involvement of circulating proteins related to apoptosis with DENV infection pathogenesis. To achieve that, 106 samples from patients with clinical suspicion of DENV infection were obtained during the 2010 epidemic in the Brazilian states of Mato Grosso do Sul and Rio de Janeiro. In the confirmation of suspicious cases, five different techniques were used: anti-dengue IgM and IgG capture ELISA, detection of viral protein NS1, viral isolation and RT-PCR. In this group, we confirmed 72 cases of dengue. Anti-dengue IgM confirmed the largest number of suspected cases. DENV-1 and DENV-2 were found. Based on the new WHO classification, we had 35 individuals with dengue without warning signs, 17 patients with dengue with warning signs and 15 individuals with severe dengue. However, the traditional dengue classification only diagnosed 5 cases with dengue hemorrhagic fever. In 67 dengue patients the levels of two pro-apoptotic molecules (TRAIL, FasL) and an anti apoptotic protein (Survivin) were determined. Elevated levels of TNF-α, FasL and TRAIL were found in patients with dengue without warning signs compared to controls and severe patients. Our results did not indicate important correlations between TNF-α and parameters associated to severity, but we observed positive correlations of FasL and TRAIL with platelets, and TRAIL with hematocrit. However, the only fatal case presented the highest plasmatic level of FasL. Interestingly, TRAIL was inversely correlated with lymphocytes counting. Regarding Survivin, the results indicated dengue with warning signs group showed diminished levels than controls and severe patients and it is interesting that Survivin was positively correlated with leukocytes counting. Thus, TRAIL would be a good prognosis indicator of the disease, and TRAIL could be involved with greater death susceptibility of lymphocytes. On the other hand, Survivin might be participating in the proliferation and/or migration of leukocytes. So far, this is the first work that study circulating mediators of apoptosis using the new clinical dengue classification. More research is needed to discern the complex interactions among pro and anti-apoptotic molecules and their implications in dengue severity.
keywords: Marcadores Circulantes
DeCS: Dengue Grave
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real
Apoptose
Receptores do Ligante Indutor de Apoptose Relacionado a TNF
Dengue
Issue Date: 2012
Publisher: Instituto Oswaldo Cruz
Citation: LIMONTA VELÁSQUEZ, Daniel de Jesús. Marcadores circulantes de morte celular por apoptose em dengue. 2012. 75f. Dissertação (Mestrado em Biologia Celular e Molecular)- Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, RJ, 2012.
Date of defense: 2012-03-26
Place of defense: Rio de Janeiro/RJ
Department: Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz
Program: Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular
Copyright: open access
Appears in Collections:IOC - PGBCM - Dissertações de Mestrado

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