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Title: Análise fosfoproteomica da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi
Advisor: Krieger, Marco Aurelio
Members of the board: Krieger, Marco Aurelio
Veras, Patrícia Sampaio Tavares
Schenkman, Sergio
Fragoso, Stenio Perdigão
Authors: Marchini, Fabricio Klerynton
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil
Abstract: Fosforilação é uma modificação pós-traducional que ocorre de forma relativamente abundante no proteoma. Essa modificação é essencial na regulação de diversas vias de transdução de sinal e processos celulares, desta forma, a identificação de sítios de fosforilação nas proteinas pode levar a uma melhor compreensão da sinalização celular e seus impactos. A fosforilação proteica é tida como um mecanismo de controle de grande importância para os parasitas protozoários da Ordem Kinetoplastida, dado o fato destes organismos possuírem um grande conjunto de genes que codificam para quinases e fosfatases, associado ao notável deslocamento da importância de eventos que ocorrem póstranscricionalmente na regulação da expressão gênica destes organismos unicelulares. Desta forma, objetivando caracterizar sítios de fosforilação de Trypanosoma cruzi, peptídeos fosforilados provenientes de amostras obtidas em diferentes etapas da diferenciação celular (metaciclogênese), foram enriquecidos utilizando cromatografia de TiO2 e identificados em um espectrômetro de massas LTQ-Orbitrap. Como resultado deste enriquecimento 1671 proteinas foram identificadas, destas 753 foram associadas a 2572 sítios de fosforilação distribuídos em 2162 (84,1%) serinas (S), 384 (14,9%) treoninas (T) e 26 (1,0%) tirosinas (Y) fosforiladas. A ocorrência de fosforilação em tirosina, mesmo com a ausência de genes que codificam proteino-kinases de tirosina no genoma de T. cruzi, sugere que proteino-quinases de dupla especificidade podem estar atuando como neste mecanismo. A partir dos dados gerados em comparação com análises de ontologia gênica, algumas funções biológicas foram encontradas sobrerepresentadas e, com este conjunto de dados, também foram identificados motivos de fosforilação. Este dados evidenciam vias reguladas por fosforilação em T. cruzi abrindo novas possibilidades para o estudo e a caracterização de vias de transdução de sinal deste organismo.
Abstract: Phosphorylation is a reversible post-translation modification spread across the proteome. This modification is essential in the regulation of several signal transduction pathways and different biological processes and, therefore, the identification of protein phosphorylation sites is valuable to address cell signaling control at the molecular level. Protein phosphorylation is suggested to be of great importance for the protozoan parasites of the Order Kinetoplastida (e.g. Trypanosoma cruzi) due to the high number of both their kinase and phosphatase genes and the important role of post-transcriptional control in the gene expression of these unicellular organisms. As an attempt to deeply characterize the phosphoproteome of T. cruzi, protein samples from cells at different differentiation stages during the metacyclogenesis process were enriched for phosphopeptides using TiO2 chromatography and analyzed using an LTQ-Orbitrap mass spectrometer. All together, we identified 1671 proteins, including 753 phosphoproteins with a total of 2572 phosphorylation sites, positioned in 2162 (84.1%) serine (S), 384 (14.9%) threonine (T) and 26 (1.0%) tyrosine (Y) residues. The occurrence of tyrosine phosphorylation, despite the absence of dedicated tyrosine kinases in the genome of T. cruzi, suggests that dual specificity kinases might be compensating the function for these absent genes. Examples of biological properties were found on the phosphorylated proteins and so from the motifs extrated from the phorphorylation sites. This work gave insights from the pathways regulated by protein kinases opening new possibilities of biological caracterization of transductional pahways from this organism.
keywords: Proteinas quinases.
Fosfoproteoma
Fosforilação
Trypanosoma cruzi
Metaciclogênese
Issue Date: 2010
Publisher: Instituto Oswaldo Cruz
Citation: MARCHINI, Fabricio Klerynton Análise fosfoproteomica da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi / Fabricio Klerynton Marchini. – Curitiba, 2010. ix, 111 f. : il. ; 30 cm. Tese (Doutorado em Biologia Celular e Molecular) Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, 2010.
Date of defense: 2010-01-22
Place of defense: Instituto Oswaldo Cruz
Department: Vice Direção de Ensino, Informação e Comunicação
Defense institution: Instituto Oswaldo Cruz
Program: Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular
Copyright: restricted access
Appears in Collections:IOC - PGBCM - Teses de Doutorado

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