Análise fosfoproteomica da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi

Abstract

Fosforilação é uma modificação pós-traducional que ocorre de forma relativamente abundante no proteoma. Essa modificação é essencial na regulação de diversas vias de transdução de sinal e processos celulares, desta forma, a identificação de sítios de fosforilação nas proteinas pode levar a uma melhor compreensão da sinalização celular e seus impactos. A fosforilação proteica é tida como um mecanismo de controle de grande importância para os parasitas protozoários da Ordem Kinetoplastida, dado o fato destes organismos possuírem um grande conjunto de genes que codificam para quinases e fosfatases, associado ao notável deslocamento da importância de eventos que ocorrem póstranscricionalmente na regulação da expressão gênica destes organismos unicelulares. Desta forma, objetivando caracterizar sítios de fosforilação de Trypanosoma cruzi, peptídeos fosforilados provenientes de amostras obtidas em diferentes etapas da diferenciação celular (metaciclogênese), foram enriquecidos utilizando cromatografia de TiO2 e identificados em um espectrômetro de massas LTQ-Orbitrap. Como resultado deste enriquecimento 1671 proteinas foram identificadas, destas 753 foram associadas a 2572 sítios de fosforilação distribuídos em 2162 (84,1%) serinas (S), 384 (14,9%) treoninas (T) e 26 (1,0%) tirosinas (Y) fosforiladas. A ocorrência de fosforilação em tirosina, mesmo com a ausência de genes que codificam proteino-kinases de tirosina no genoma de T. cruzi, sugere que proteino-quinases de dupla especificidade podem estar atuando como neste mecanismo. A partir dos dados gerados em comparação com análises de ontologia gênica, algumas funções biológicas foram encontradas sobrerepresentadas e, com este conjunto de dados, também foram identificados motivos de fosforilação. Este dados evidenciam vias reguladas por fosforilação em T. cruzi abrindo novas possibilidades para o estudo e a caracterização de vias de transdução de sinal deste organismo.