Participação de leucotrieno B4 na migração e na ativação de linfócitos T γδ

Abstract

Os linfócitos T γδ desempenham funções importantes na resposta imune contra infecções, na resposta alérgica e na imunidade anti-tumoral. Durante processos inflamatórios, é observado um acúmulo destas células nos tecidos, um fenômeno que acontece em função da migração induzida pela liberação de mediadores quimiotáticos, incluindo a quimiocina CCL2. O leucotrieno (LT) B4 é um mediador lipídico capaz de recrutar linfócitos T αβ e de modular positivamente a produção de CCL2 in vivo e in vitro. Porém, o envolvimento de LTB4 na migração de linfócitos T γδ ainda não havia sido descrito. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi investigar o papel do LTB4 na migração e na ativação de linfócitos T δ de forma direta, ou de forma indireta, via produção de CCL2. Nossos resultados demonstraram que o LTB4 induziu a migração de linfócitos T γδ in vivo e in vitro. Demonstramos que linfócitos T δ expressam o receptor de alta afinidade para o LTB4, o BLT1, e que o LTB4 induziu reorganização no citoesqueleto de linfócitos T γδ isolados. Demonstramos ainda que a resposta inflamatória pleural induzida por LPS levou ao aumento na produção de LTB4 (e de CCL2), o que ocorreu em paralelo ao acúmulo de linfócitos T γδ. A inibição da síntese de LTB4, assim como o bloqueio de BLT1, foi capaz de inibir a migração de linfócitos T γδ in vitro e in vivo em diferentes modelos de pleurisia (induzida por LPS, alérgeno e Mycobacterium bovis BCG). De forma interessante, somente a migração in vivo do subtipo de linfócitos T γδ que expressa a cadeia Vγ4 (mas não as Vγ6.3 ou Vδ4) foi inibido pelo bloqueio de BLT1. Corroborando estes resultados, observamos que os linfócitos T Vγ4 expressam o BLT1, assim como o receptor de CCL2, o CCR2. De acordo, o LTB4 e a CCL2 induziram a quimiotaxia dos linfócitos T Vγ4 in vitro. Entretanto, a injeção i.pl. de LTB4 em camundongos deficientes na expressão de CCR2 induziu o acúmulo de linfócitos T γδ, mas não do subtipo Vγ4, reforçando o papel deste mediador na migração de linfócitos T Vγ4. Ao avaliarmos os parâmetros de ativação dos linfócitos T γδ, observamos que o estímulo in vitro com anticorpo anti-CD3 aumentou os níveis de expressão de BLT1 em células T γδ, indicando que linfócitos T γδ ativados são mais responsivos a LTB4. Entretanto, a adição de LTB4 ao estímulo com anticorpo anti-CD3 induziu apenas um pequeno aumento na proliferação e na produção de IFN- e IL-4 nos linfócitos T γδ (em comparação ao estímulo com anti-CD3). Para avaliar se o LTB4 aumentava a atividade citotóxica dos linfócitos T γδ in vivo, nós utilizamos o modelo murino de metástase pulmonar utilizando a linhagem tumoral B16F10. Nós observamos que, nos pulmões com metástase tumoral, ocorre tanto o acúmulo de linfócitos T γδ quanto a produção de LTB4 e CCL2. Nossos resultados preliminares indicam que a transferência adotiva de linfócitos T γδ previamente estimulados com LTB4 para animais injetados com B16F10 levou à redução da formação de nódulos tumorais nos pulmões. Em conjunto, nossos resultados demonstram que o LTB4 induz a migração de linfócitos T γδ (incluindo o subtipo Vγ4) de forma direta (via BLT1) e indireta (via modulação de CCL2). Ainda, nossos dados sugerem que o LTB4 modula a atividade citotóxica destas células, o que ainda deve ser melhor investigado.