Ontogenia do sistema hematopoético de embriões de Gallus gallus domesticus L.: a expansão da hematopoese no saco vitelínico e sua migração para o fígado e para a medula óssea

Abstract

O presente trabalho objetivou estudar aspectos morfológicos e funcionais do sistema hematopoético em diferentes fases do desenvolvimento embrionário de Gallus gallus domesticus L. Ovos embrionados foram incubados entre 26 horas a 21 dias de desenvolvimento (dd). Embriões e seus anexos foram coletados diariamente e blocos histológicos foram produzidos. Seções de cada bloco foram coradas pelas técnicas HE, Giemsa de Lennert, Sirius Red pH 10,2 e PAS, analisando-se o saco vitelínico, fígado e medula óssea. O saco vitelínico foi o único sítio hematopoético dentre 13 e 14dd. Dos 14 aos 20dd, a hematopoese ocorreu no saco vitelínico e na medula óssea. O fígado mostrou diferenciação granulocítica no conjuntivo dos espaços portais a partir dos 15dd. As linhagens eritrocítica e granulocítica se expandiram no saco vitelínico, respectivamente de 6 a 19dd e de 7 a 20dd. Na medula óssea, os granulócitos foram observados aos 10dd, seguindo o estabelecimento da granulopoese no estroma aos 14dd e da eritropoese nos sinusóides aos 15dd. Aspectos topográficos e morfológicos de sacos vitelínicos foram detalhados, associando macroscopia à microscopia. Membranas vitelínicas de 12 e 14dd foram analisadas macroscopicamente, regionalizadas em áreas, observadas ao microscópico estereoscópico e processadas. Os cortes foram corados em HE e escaneados em digitalizador de lâminas. Macroscopicamente, as membranas vitelínicas possuem três áreas concêntricas. A microscopia estereoscópica demonstrou uma cobertura translúcida nas veias vitelínicas e que varia de translúcida a opaca nas artérias. Em ambos os vasos, essa cobertura é o endoderma. Eritropoese e granulopoese ocorreram nas adjacências das artérias e nas três regiões. Em membranas vitelínicas de diferentes estádios, as colorações PAS, PAS-AB (pH 2,5 e 1,0), picrosirius, resorcina fucsina de Weigert e reticulina de Gomori foram realizadas, além de imunohistologia para diferentes anticorpos. Observou-se positividade para alfa-actina de músculo liso na vasculatura vitelínica e expressão para a fibronectina no entorno dos vasos e na matriz extracelular durante o desenvolvimento. Análises tomográficas à microscópia confocal de membranas vitelínicas coradas com berberina e laranja de acridina demonstraram a presença de ramos arteriais. Focos de granulopoese se dispuseram numa matriz constituída por glicoproteínas, glicosaminoglicanos, fibras reticulares e fibronectina. A eritropoese ocorre nos ramos arteriais, delimitados pelas moléculas supracitadas, fibras colágenas e elásticas. A concentração e localização das fibras reticulares variaram de acordo com o desenvolvimento, sendo presentes entre artérias, seus ramos e endoderma; entre endoderma e veias. Células endodérmicas, eritroblastos e granulócítos em diferenciação expressaram VEGF. Eritroblastos foram VEGF-C positivos e a expressão de VEGFR-3 mostrou-se presente em vasos de pequeno calibre. Em conclusão, o presente estudo sugere que: 1- o saco vitelínico é o principal sítio de expansão no Gallus gallus sp.; 2- a hematopoese hepática é restrita à granulopoese, aos espaços porta e quando a medula óssea é funcional; 3- a eritropoese no saco vitelínico e medula óssea do Gallus gallus sp. está associada ao endotélio e à granulopoese, ao estroma; 4- as fibras reticulares no saco vitelínico desempenham funções de sustentação, na granulopoese e participam da morfogênese deste anexo; 5- células endodérmicas e hematopoéticas modulam a angiogênese no saco vitelínico.