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Title: Padronização de condições experimentais no cultivo e quantificação de Entamoeba histolytica que otimizem ensaios de compostos potencialmente amebicidas
Advisor: Santos, Marcos André Vannier dos
Members of the board: Vallve, Maria de Lourdes Farre
Soares, Milena Botelho Pereira
Authors: Santos, Gustavo Miranda Pires
Coadvisor: Rangel, Adriana Lanfredi
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil
Abstract: O protozoário, Entamoeba histolytica, constitui a etiologia de milhares de óbitos anuais e, em muitos casos, a falta de saneamento, o grau de instrução e a falta de higiene da população podem favorecer a transmissão e a manutenção desses patógenos em uma comunidade. Por causar tantas mortes e problemas na saúde pública trabalhos que facilitem o estudo deste parasito fazem-se importantes. Uma vez que a padronização de cultivo de E. histolytica em placas de poços vai Existem indicações que mostram que este parasito pode se tornar resistente ao medicamento utilizado no tratamento desta protozoose, por isso, a busca por novas substâncias que possam atuar como tratamento alternativo é de suma importância. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi otimizar e padronizar o cultivo e a contagem deste parasito in vitro, além de identificar substâncias com potencial amebicida, que possam ser utilizadas no futuro como fármacos no tratamento da amebíase, sugerindo também uma via possível de ação das substâncias que apresentaram os melhores efeitos. Para tanto, os trofozoítos foram cultivados em placas de 24 poços sobre diferentes condições, quatro métodos de contagem de células foram comparados e 74 (setenta e quatro) substâncias foram testadas. Destas 13 (treze) apresentaram uma inibição na proliferação axênica dos trofozoítos de cerca de 70%. Destas, três compostos foram estudados em mais detalhes, os mesoiônicos derivados da piperina (as MII, MVI e MIX). Estas substâncias pertencem ao grupo dos compostos mesoiônicos, substâncias formadas por um anel heteroatômico composto por nitrogênio, carbono e enxofre, capazes de atravessar membranas e interagir com biomoléculas. Além disso, alguns mesoiônicos são doadores de radicais NO e tais grupamentos são capazes de induzir uma morte celular semelhante à apoptose em E. histolytica, como sugerido pela expressão de fosfatidil-serina revelada por anexina-V. Confirmando os resultados descritos na literatura, estas substâncias foram capazes de induzir uma morte programada, porém observações da ultra-estrutura, tais como figuras de mielina, das células tratadas apontaram para autofagia que também foi evidenciada por testes com MDC gerando apoptose tipo II, que pode ser iniciada pela presença de ROS, que neste caso foram por DCFDA.
Abstract: The protozoan parasite, Entamoeba histolytica, is the etiology of thousands of deaths annually and in many cases lack of sanitation, education level and poor hygiene of the population may facilitate the transmission and maintenance of these pathogens in a community. There are indications showing that this parasite may become resistant to the drug used in treatment of protozoal disease, so the search for new substances that can act as an alternative treatment is of paramount importance. Therefore, the aim of this study was to optimize and standardize the cultivation and enumeration of this parasite in vitro, and identify substances with potential amebicidal, which can be used in future as drugs for the treatment of amoebiasis, suggesting a possible route of action of the compounds that showed the greatest effects. For this purpose, trophozoites were cultured in 24-well plates under different conditions, four methods of cell count were compared and 74 (seventy four) substances were tested. Of these thirteen (13) showed an inhibition in the proliferation of axenic trophozoites of about 70%. Of these, three compounds were studied in more detail, the mesoionic derivatives of piperine (the MII, MVI and MIX). These substances belong to the group of mesoionic compounds, formed by a heteroatomic ring composed of nitrogen, carbon and sulfur, able to traverse membranes and interact with biomolecules. Moreover, some donors are mesoionic radicals NO and such groups are able to induce a cell death similar to apoptosis in E. histolytica, as suggested by the expression of phosphatidyl-serine revealed by annexin-V. Confirming the results described in the literature, these substances were capable to inducing a programmed death, but observations of the ultra-structure, such as myelin figures, treated cells pointed out that autophagy was also evidenced by tests with MDC generating apoptosis type II can be initiated by the presence of ROS, which in this case were by DCFDA.
Keywords: Entamoeba histolytica
Chemotherapy
Mesoionic
keywords: Entamoeba histolytica
Quimioterapia
Mesoiônicos
DeCS: Amebicidas
Issue Date: 2011
Publisher: Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz
Citation: SANTOS, G. M. P. Padronização de condições experimentais no cultivo e quantificação de Entamoeba histolytica que otimizem ensaios de compostos potencialmente amebicidas. 2011. 73 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa) - Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz, Salvador, 2011.
Date of defense: 2011
Place of defense: Salvador/BA
Department: Departamento de Vice Diretoria e Ensino
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz
Program: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Copyright: open access
Appears in Collections:BA - IGM - Dissertações de Mestrado

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