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Title: Produção de anticorpos contra TcHIP e cruzipaína de Trypanosoma Cruzi com aplicação no estudo de endocitose em amastigotas
Advisor: Eger, Iriane
Soares, Maurílio José
Members of the board: Perdigão Fragoso, Stênio
Dallagiovana Muniz, Bruno
de Freitas Buchi, Dorly
Authors: Martin Batista, Cassiano
Affilliation: Fundação Oswaldo cruz, Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.
Abstract: A endocitose é um evento biológico já bem descrito em formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi, onde macromoléculas são internalizadas através da bolsa flagelar e/ou do complexo citóstoma/citofaringe e direcionadas aos reservossomos. Reservossomos são grandes organel estocam moléculas ingeridas e cruzipaína. O objetivo desta dissertação foi produzir anticorpos policlonais ou monoclonais (mAbs) contra proteínas identificada (cruzipaína e TcHIP), e utilizá estudos de endocitose em formas amastigotas de foram expressas em E. coli reatividade dos anti-soros foi confirmada por cruzi e contra proteína recombinante. Imunolocalização utilizando anticorpos policlonais anti-TcHIP mostrou que esta proteína está presente no complexo de Golgi em T. cruzi, o que foi confirmado por co anticorpos policlonais obtidos contra cruzipaína recombinante demonstraram esta proteína no Golgi e em reserv mAbs, esplenócitos de um camundongo imunizado com cruzipaína recombinante foram fusionados com células de mieloma da linhagem P3X63Ag8.653 (ATCC CRL Os hibridomas foram triados p hibridoma mais estável foi cruzipaína recombinante (mAb CZP Este anticorpo foi utilizado como ferramenta pa transferrina ingerida com a cruzipaína em formas amastigotas. Foi também possível demonstrar pela primeira vez por citometria de fluxo a atividade endocítica em formas amastigotas de T. cruzi. Trypanosoma cruzi, organelas localizadas na região posterior do parasito que contém enzimas lisossomais, como por exemplo a identificadas na proteômica de reservossomos utilizá-las como marcadores de organelas da via endocítica e em T. cruzi. Proteínas recombinantes coli, purificadas e inoculadas em camundongos Balb/c. A western blot contra extrato total de, co-localização com TcRab7-GFP. Por outro lado, reservossomos de epimastigotas de T. cruzi.
Abstract: Endocytosis is a biological event well described in where macromolecules are cytofarynx complex and organelles found at the posterior region of the and contain lysosomal enzymes, such as cruzipain. produce polyclonal or monoclonal antibodies (mAbs) against proteins identified in proteomic analyzes of reservosomes (cruzipain and Tc to label organelles of the endocytic pathway and amastigotes. Recombinant proteins were expressed in into Balb/c mice. Reactivity of the anti extracts of T. cruzi and recombinant protein antibodies anti-TcHIP showed this protein in the Golgi apparatus confirmed by co-localization with GFP recombinant cruzipain recognized the epimastigotes. For production of mAbs, splenocytes with recombinant cruzipain were fused with the P3X63Ag8.653 myeloma cell line (ATCC CRL-1580). Hybridomas were immunofluorescence. The most stable hybridoma was selected for limiting dilution and one clone against recombinant cruzipain (mAb CZP reservosomes. This antibody co-localization of uptaken transferrin with cruzipain. It was also possible to demonstrate for the first time by flow cytometry of Trypanosoma cruzi Trypanosoma cruzi ingested via the flagellar pocket and/or then targeted to reservosomes. Reservosomes are cell body that store ingested molec Aim of this dissertation TcHIP), and use the to study endocytosis in E. coli, purified and inoculated eactivity anti-sera was confirmed by western blot proteins. Immuno-localization using polyclonal of T. cruzi GFP-TcRab7. Polyclonal antibodies against protein in the Golgi and reservosomes of obtained from a mouse immunized then screened by ELISA, western blot and CZP-315.D9) was obtained, specific was then used as a tool to investigate in amastigotes the the endocytic activity in T. cruzi amastigotes.
keywords: Trypanosoma cruzi
Endocitose
Reservossomos
Complexo de Golgi
Issue Date: 2014
Citation: BATISTA, C. M. Produção de anticorpos contra TcHIP e cruzipaína de Trypanosoma cruzi, com aplicação no estudo de endocitose em amastigotas. 2014. 90 f. Dissertação (Mestrado em Biociências e Biotecnologia) - Instituto Carlos Chagas, Fundação Oswaldo Cruz, 2014.
Date of defense: 2014
Place of defense: Curitiba PR
Defense institution: Fundação Oswaldo cruz, Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil
Program: Programa de Pós-Graduação em Biociências e Biotecnologia
Copyright: open access
Appears in Collections:PR - ICC - Dissertações de Mestrado

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