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Title: Associação de polimorfismos e expressão gênica de marcadores de apoptose ligados carcinogênese cervical induzida pelo hpv em mulheres infectadas ou não pelo HIV
Advisor: Almeida, Maria da Glória Bonecini de
Members of the board: Serpa, Maria José Andrade
Oliveira, Rosely Zancopé
Silva, Fátima Conceição
Russomano, Fabio
Bisaggio, Rodrigo da Cunha
Authors: Fernandes, Ana Teresa Gomes
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil
Abstract: A citotoxicidade mediada por células desempenha um importante papel na regulação da infecção pelo HPV e na formação de tumores. Apoptose é regulada por diferentes vias envolvendo genes que promovem (BAX) ou inibem (BCL2) a morte celular. Avaliamos a presença de células cervicais inflamatórias, marcadores apoptóticos (BAX, BCL-2, FasL, NOS2, perforina) e o marcador de degranulação (CD107a) em mulheres HPV e HPV/HIV através da técnica de imunohistoquimca. Uma alta porcentagem de células T CD4+ e CD8+ foram observadas em ambos os grupos, com baixa contagem de células T CD4+ em mulheres HPV/HIV. Houve poucas células expressando FasL, BAX e BCL-2 em ambos os grupos. A expressão de NOS2 estava presente especialmente em queratinócitos na camada basal do epitélio em ambos os grupos. Perforina foi idenficada em poucas células cervicais. Contudo, CD107a foi detectado na camada basal do epitélio e estroma, principalmente em mulheres HPV. Determinamos se os SNPs em promotores dos genes BCL2 (-938C>A) e BAX (-248G>A) estariam associados com o risco de neoplasia intraepitelial cervical (NIC) A frequência observada desses SNPs estavam em equilíbrio de Hardy\2013Weinberg nos casos e controles. Nenhuma diferença estatística na frequência genotípica e alélica do polimorfismo de BCL-2 (-938C>A) foi observada entre casos e controles. Contudo, uma forte associação foi identificada na freqüência do genótipo GG de BAX (-248G>A) entre os casos e controles. Quando os grupos de LSIL e HSIL foram comparados, nenhuma diferença estatística foi observada, indicando que o genótipo GG pode influenciar no aparecimento de lesões cervicais, mas não na gravidade da doença. Analisamos a expressão de RNAm de genes associados a apoptose (BAX, BCL2, p53 e pRb) e citotoxicidade (perforina e Fas). Quando a expressão de RNAm de Perforina e Fas foram avaliadas, diferença estatística foi observadas em pacientes portadoras de NIC III e câncer Observamos diferença estatística entre os controles e todos os casos, quando analisamos a expressão de RNAm de p53, mas não de pRb, sendo observada diferença apenas nos controles e NIC II e III. Na analise de RNAm de BCL2, notamos uma baixa expressão no grupo de câncer quando comparado com NIC II, III e controle. Em conclusão, a infecção pelo HIV pode induzir redução na degranulação de células inflamatórias, corroborando para a progressão de infecção pelo HPV, e que carreadoras do alelo G na região promotora de BAX (-248G>A) pode estar associado ao desenvolvimento de NIC quando comparado com as carreadoras do alelo A, possuindo papel protetor; contudo o alelo G não está correlacionado com a gravidade da doença
Abstract: Cell - mediated cytotoxicity plays an important role in the regulation of HPV infection, and in tu mor formation. Apoptosis is regulated by different pathways involving a number of genes that either prom ote ( BAX gene)or inhibit ( BCL2 gene) the cell death. We evaluated the presence of cervical inflammatory cells, apoptotic (Bax, Bcl - 2, FasL, NOS2, perforin) markers and the degranulating expressing cell marker (CD107a) from HPV and HPV/HIV women. Higher per centage of cervical CD4 + and CD8 + T cells were observed in both groups, with lower CD4 + T cells count observed in HPV/HIV women. There were few FasL, Bax and Bcl - 2 inflammatory cervical expressing cells in both groups. NOS2 expression was present especially in the epithelium basal layer on keratinocytes in both groups. Perforin was identified in few cervical cells. However, CD107a was detected in the epithelium basal layer and stroma, meanly on HPV women. We determined whether the SNPs of BCL2 ( - 938C>A) and BAX ( - 248G>A) promoters are associated with risk of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) outcome. The observed genotype frequencies of these SNPs were in agreement with Hardy – Weinberg equilibrium in cases and control groups. No statistical difference i n genotype and allelic frequency of BCL - 2 ( - 938C>A) polymorphism was observed between all cases and control groups. However, a strong association was identified in GG genotype frequency of BAX ( - 248G>A) polymorphism between cases and controls. When LSIL an d HSIL groups were compared, no statistical difference was observed, indicating that GG genotype may influence the risk of CIN but not the lesion severity. We analyzed the mRNA expression of apoptosis - associated genes ( BAX, BCL2, p53 and pRb ) and cytotoxic ity - related genes ( perforin and Fas ). When Fas and Perforin mRNA expressions were evaluated, the statistical difference between CIN III and cancer was seen. We observed a statistical difference between control and all cases, when we analyzed p53 mRNA, but in pRb mRNA, we observed difference between control group and CIN II or CIN III. In BCL2 mRNA evaluation, we observed low expression in cancer group when compare with CIN II, III and control. In relation to BAX mRNA, a statistical difference was evaluated with all cases and control. In conclusion, HIV infection may induce reduction on inflammatory cervical cells degranulation corroborating to HPV progression and allele G carriers in the promoter regions of BAX ( - 248G>A) can be related to CIN development whe n compared with allele A carriers that play a protective role; however, allele G was not correlated with the disease severity
DeCS: Polimorfismo Genético
Citotoxicidade Celular Anticorpo-Dependente
Papillomaviridae
HIV
Issue Date: 2011
Citation: FERNANDES, A. T. G. Associação de polimorfismos e expressão gênica de marcadores de apoptose ligados carcinogênese cervical induzida pelo hpv em mulheres infectadas ou não pelo HIV. 2011. 85f. Tese (Doutorado em Pesquisa Clínica em Doenças Infecciosas) - Fundação Oswaldo Cruz, Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, 2011
Date of defense: 2011
Place of defense: Rio de Janeiro/RJ
Department: Pós-Graduação em Pesquisa Clínica em Doenças Infecciosas
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas
Program: Programa de Pós-Graduação em Pesquisa Clínica em Doenças Infecciosas
Copyright: open access
Appears in Collections:INI - PCDI - Teses de Doutorado

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