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RECOVERY OF NOROVIRUS FROM LETTUCE (LACTUCA SATIVA) USING AN ADSORPTION — ELUTION METHOD WITH A NEGATIVELY CHARGED MEMBRANE: COMPARISON OF TWO ELUTION BUFFERS
Alternative title
Recuperação de Norovirus a partir de alface (Lactuca sativa) utilizando um método de adsorção-eluição com membrana negativamente carregada — comparação de dois tampões de eluiçãoAuthor
Affilliation
Abstract in Portuguese
Salina tamponada fosfatada (STF) e tampão glicina (TG) foram avaliados como eluentes
em um método de adsorção-eluição, utilizando membrana carregada negativamente
associada com reação quantitativa de polimerase em cadeia (qPCR) e semi-nested PCR,
para detecção de Norovírus do genogrupo II (NoV GII) a partir de alface. Nesta metodologia,
o bacteriófago PP7 foi utilizado como controle do processo. A qPCR apresentou
maior sensibilidade do que o semi-nested PCR na detecção de NoV GII. A eficiência de
recuperação, utilizando STF e TG, variou de 24,72 a 60,78% e de 19,48 a 137,26% para
NoV GII e de 0,01 a 0,15% e de 0,13 a 6,04% para o bacteriófago PP7, respectivamente.
A eluição com TG foi mais eficiente na recuperação do bacteriófago PP7 (p = 0,03) embora
nenhuma diferença tenha sido observada para NoV GII (p = 0,57). O TG apresentou
melhor desempenho que a STF como solução para eluição e pode ser considerada uma
melhoria do método.
Abstract
Phosphate saline buffer (PBS) and glycine buffer (GB) were evaluated as elution buffers
in an adsorption-elution method using a negatively charged membrane associated
with quantitative polymerase chain reaction (qPCR) and semi-nested PCR for detection
of Norovirus genogroup II (NoV GII) from lettuce. In this methodology, PP7 bacteriophage
was used as a virus sample for process control. The qPCR showed more sensitivity
than semi-nested PCR for NoV GII detection. The recovery efficiency, using PBS and GB,
ranged from 24.72 to 60.78% and 19.48 to 137.26% for NoV GII, and from 0.01 to 0.15%
and 0.13 to 6.04% for PP7 bacteriophage, respectively. Elution with GB was more efficient
for PP7 bacteriophage recovery (p = 0.03), but no difference was seen for NoV GII
(p = 0.57). The GB performed better than PBS as an eluent solution and can be considered
a methodological improvement.
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