Otimização do preparo de meio de cultura Schneider para o isolamento de Leishmania sp

Abstract

As Leishmanioses constituem umgrupo de doenças infecciosas, não contagiosas, causadas por diferentes espécies de protozoários do gênero Leishmania, sendo transmitidas pela picada de fêmeas de insetos conhecidos como flebotomíneos, apresentando-se sob duas formas clínicas: Leishmaniose tegumentar americana e Leishmaniose visceral. O diagnóstico de certeza é realizado por demonstração do parasito podendo ser feita através de inoculação de fragmentos de lesão ou outro material clínico em meios de cultura específicos. Um dos inconvenientes desse método é a possibilidade de contaminação da cultura, o que inviabiliza o exame Para evitar essa contaminação alguns cuidados são tomados como a utilização de antibióticos (benzilpenicilina e estreptomicina) e antifúngico (flucitosina) que são adicionados à solução de coleta e a utilização de antibióticos no meio de cultura. O conhecimento da estabilidadee as concentrações ideais dos compostos utilizados são fatores importantes a serem considerados, pois podem determinar o sucesso do diagnóstico. Neste estudo avaliamos a estabilidade e o efeito dessas substâncias no crescimento do parasito in vitro. Para análise da estabilidade foi primeiramente desenvolvido um método para separação das substâncias de interesse por Cromatografia líquida de alta eficiência que se mostrou muito eficazpara a separação, os resultados desta análise mostraram que o antibiótico benzilpenicilina sofreu cerca de 10% de degradação no prazo de 4 dias a 4 ºC e cerca de 20% de degradação durante 24 horas a temperatura ambiente enquanto a concentração de estreptomicina permaneceu praticamente inalterada sob as mesmas condições. Esses resultados mostram a importância da utilização correta dessas soluções a fim de evitar perda da sua atividade. Com relação à inibição do crescimento do parasito in vitro, as concentrações de 1000, 500 U/mL de benzilpenicilina e 1000, 500 μg/mL de estreptomicina e flucitosina assim como 200 U/mL benzilpenicilina + 200 μg/mL estreptomicina mostraram inibição significativa do crescimento, mostrando que as concentrações de benzilpenicilina e estreptomicina na composição de culturas de Leishmania sp.devem ser abaixo de 200 U/mL e 200 μg/mL, respectivamente.