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Title: Análise da expressão heteróloga de protéinas com domínios de ligação a RNA em Leishmania infantum
Other Titles: Expression analysis of heterologous proteins with RNA-binding domains in Leishmania infantum
Advisor: Melo Neto, Osvaldo Pompílio
Members of the board: Melo Neto, Osvaldo Pompílio de
Silva, Norma Lucena Cavalcanti Licínio da
Melo, Tatiany Patrícia Romão Pompílio de
Authors: Silva, João Ramos da Cruz
Coadvisor: Lima, Tamara De'Carli da Costa
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil
Abstract: Os tripanossomatídeos possuem uma combinação não usual de mecanismos moleculares, e seus processos de regulação de expressão gênica ocorreram a nível pós-transcricional. Acredita-se que essa regulação envolva tanto o controle da estabilidade dos mRNAs, como sua tradução em proteínas, eventos em que atua a proteína de ligação à cauda poli-A (PABP - Poly-A Binding Protein), uma das principais proteínas de ligação a RNAs em eucariotos. Um grande número destas proteínas está presente nos tripanosomatídeos, se caracterizando por possuírem domínios típicos de ligação a RNA, como o domínio RRM (RNA Recognition Motif). Dentre estas se destacam as proteínas de ligação a sequências ricas em uridina (UBPs), que se mostraram capazes de interagir com homólogos de PABP. Outras proteínas hipotéticas contendo domínios de ligação a RNA foram identificadas em ensaios que buscavam parceiros diferenciais para os três homólogos de PABP de Leishmania. Este trabalho se propôs a contribuir na caracterização funcional das proteínas UBPs e das proteínas hipotéticas, através da otimização de sua expressão de forma heteróloga em L. infantum, fusionadas ao epítopo HA. Para isto, os genes codificantes dos três homólogos de UBPs, e de cinco outras proteínas de ligação a RNA que parecem interagir com PABPs, foram amplificados e clonados em vetor de expressão de Leishmania. As construções geradas foram transfectadas em L. infantum e a expressão de seis destas proteínas avaliada. Os resultados obtidos mostram uma variação no reconhecimento das proteínas geradas com anticorpos comerciais anti-HA, que parecem depender da sequência de aminoácidos da sua extremidade C-terminal. Diferenças significativas nos seus níveis de expressão também foram observadas. Entre os três homólogos de UBP, dois destes se mostraram mais abundantes enquanto que os três são representados por mais de uma banda, indicando possíveis modificações pós-traducionais
keywords: Regulação da Expressão Gênica Proteína de Ligação à Cauda poli-A Proteínas de Ligação a RNA RRM
DeCS: Regulação da Expressão Gênica
Proteínas de Ligação a RNA
Leishmania infantum
Transdução de Sinal
Issue Date: 2014
Publisher: Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães
Citation: SILVA, João Ramos da Cruz. Análise da expressão heteróloga de protéinas com domínios de ligação a RNA em Leishmania infantum. 2014. 73 f. Dissertação (Mestrado Acadêmico em Biociências e Biotecnologia em Saúde) - Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães, Recife, Fundação Oswaldo Cruz, 2014.
Date of defense: 2014-07-31
Place of defense: Recife/PE
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz.Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães.
Program: Programa de Pós-Graduação de Biociências e Biotecnologia em Saúde
Copyright: open access
Appears in Collections:PE - IAM - PPBBS - Dissertações de Mestrado

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