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Type
ThesisCopyright
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2017-12-21
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DESENVOLVIMENTO PÓS-EMBRIONÁRIO, MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA E SEQUÊNCIAS DE DNA DE DÍPTEROS MUSCOIDES DA FAMÍLIA SARCOPHAGIDAE DE IMPORTÂNCIA MÉDICA-VETERINÁRIA E FORENSE
Sarcofagídeos
Ecologia
Sequência de Bases
Entomologia
Genética Forense
Xavier, Alexandre da Silva | Date Issued:
2016
Author
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
As moscas Sarcophagidae, além de vetores mecânicos, agentes irritantes ou espoliadores e produtores de miíases ao homem ou animais, são importantes indicadores forenses. O cálculo para estimativa do intervalo pós-morte (IPM) pode ser feito relacionando a idade de imaturos coletados no cadáver com dados disponíveis na literatura sobre a biologia da espécie. A família Sarcophagidae é uma das que apresentam um maior potencial informativo para análises forenses, porém a morfologia de muitos imaturos não é conhecida. Isto obriga a sua criação em laboratório para, após a emergência do inseto adulto macho, ser realizada a identificação. Técnicas taxonômicas, como a microscopia eletrônica de varredura (MEV) e o DNA barcoding utilizando como marcador molecular um fragmento do gene mitocondrial COI são importantes ferramentas para auxiliar na rápida identificação destas espécies, sem a necessidade de aguardar a criação em laboratório. Além disso, métodos moleculares carregam a vantagem de obter a identificação da espécie através de fragmentos de insetos coletados numa cena de crime. Os poucos dados referentes às espécies de Sarcophagidae, principalmente na Região Neotropical, faz com que seja necessária a maior quantidade possível de informações a respeito desta família que possam vir a ser úteis para a entomologia forense. Objetivou-se aumentar o banco de dados de informações sobre espécies de Sarcophagidae que apresentam importância ou potencial importância médica-veterinária e forense através da descrição da bionomia de Peckia (Euboettcheria) anguilla, da ultraestrutura de imaturos (L1, L2, L3 e pupário) de quatro espécies e da eficiência do DNA barcoding para identificação precisa e rápida de 12 espécies coletadas em diferentes regiões. Em relação à bionomia, P. (E.) anguilla, apresentou a 27 °C viabilidade larval de 84 % e o período de L1 até L3 de 6,61 dias. As larvas L3 iniciaram o processo de pupa com peso médio de 131,17 mg. O período pupal médio foi de 13,47 dias com viabilidade de 91,6 %. O período de neolarva a adulto foi de 22,62 dias e 77 % de viabilidade. A longevidade média dos machos foi de 24,89 dias e das fêmeas foi de 32,6 dias, as quais depositaram 1326 larvas ao longo de 20 dias. O corpo das larvas das espécies estudadas segue o padrão vermiforme típico de muscoides, com 12 segmentos. A região anterior é pontiaguda, enquanto a região posterior é mais robusta. Os espinhos do colar cefálico de Ravinia belforti, com pontas duplas, triplas ou quádruplas, se mostraram diferentes dos espinhos das demais espécies estudadas. O espiráculo anterior apresentou fileiras regulares para as espécies P. (E.) anguilla e P. (E.) collusor e irregulares em P. (Pattonella) intermutans e R. belforti. Dentre as quatro espécies, R. belforti foi a que mais apresentou características que a diferenciam das demais espécies estudadas. Em relação ao DNA barcoding foi sequenciado um fragmento do gene COI de 635pb. Das 12 espécies analisadas, cinco não encontraram correspondentes no BLAST. O COI foi capaz de identificar corretamente as 12 espécies mesmo quando oriundas de populações diferentes. Estes dados são importantes para estudos sobre entomologia forense relacionados com sarcofagídeos que ocorrem no Brasil.
Abstract
The flies of Sarcophagidae family besides being important mechanical vectors and act as irritants and spoilers, as well as producing myiasis in man and animals, also play an important role as forensic indicators. The postmortem interval is related to the age of immature species of flies found on corpses and can be estimated using data available in the literature on the biology of the species. Sarcophagidae is one having a higher potential information for forensic analysis. As the morphology of many immature Sarcophagidae is unknown, these immature forms must be collected and characterized after the emergence of the adult male. Taxonomic techniques such as scanning electron microscopy (SEM) and DNA barcoding using as a molecular marker a COI mitochondrial gene fragment are important tools to assist in a rapid regardless to wait for the rearing in laboratory. Moreover, molecular methods carry the advantage of obtain a species identification through the insect fragments collected at a crime scene. The few data about flesh flies in the Neotropical region makes the greatest possible amount of information about this family is required, which may be useful for forensic entomology. This work aims to increase the database information about flesh flies with medical-veterinary and forensic importance or potential importance through the bionomy of Peckia (Euboettcheria) anguilla, the ultrastructure analysis of the immature (L1, L2, L3 and puparium) of four species and the efficiency validation of DNA barcoding for a precise identification of 12 species collected in different states of Brazil. Regarding bionomy, P. (E.) anguilla (at 27 °C) showed a larval viability of 84 % and L1-L3 period of 6.61 days. Larvae L3 began the process of pupa with an average weight of 131.17 mg. The average pupal period was 13.47 days with viability of 91.6 %. Neolarva- Adult period was 22.62 days with viability of 77 %. The longevity of males was 24.89 days and females was 32.6 days, which deposited 1326 larvae along 20 days. The larval body of the four species studied follows the typical wormlike pattern of muscoid, with 12 segments. The anterior region is narrower than the posterior region. The spines of cephalic colar of Ravinia belforti (with double, triple or quadruple points) were different from the spines of the other species studied. The anterior spiracles presented regular rows for P. (E.) anguilla and P. (Euboettcheria) collusor and irregular rows for P. (Pattonella) intermutans and R. belforti. The flesh fly R. belforti showed characteristics that differentiate it from the other species studied. With respect to DNA barcoding, a fragment of 635bp COI gene was sequenced successfully. Among the 12 species analyzed, five found no match in BLAST. The COI was able to correctly identify 12 species even from different populations. These data are important for studies of forensic entomology about flesh flies that occur in Brazil.
Keywords in Portuguese
DípterosSarcofagídeos
Ecologia
Sequência de Bases
Entomologia
Genética Forense
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