Identificação de espécies de Micobactérias de interesse médico através de um sistema da PCR multiplex

Abstract

O Complexo Mycobacterium tuberculosis e outras espécies denominadas micobactérias não causadoras de tuberculose (MNT), além do M. leprae constituem o gênero Mycobacterium. As espécies de MNT mais isoladas no Brasil são as do Complexo M. avium (44,4%), M. kansasii (13,7%), M. fortuitum (10,8%) e M. abscessus (9,5%). A identificação das MNT é realizada através de métodos baseados na avaliação de características das culturas e na realização de testes bioquímicos simples, porém demorados, além de alguns testes moleculares, que são na sua maioria caros. Este trabalho teve como objetivo avaliar uma PCR Multiplex em amostras de MNT isoladas no Laboratório de Referência Nacional em Tuberculose e Outras Micobacterioses do Centro de Referência Professor Hélio Fraga/ENSP/Fiocruz no período de 2014 e 2015 e diferencia-las do Complexo M. tuberculosis. Todas as amostras foram previamente identificadas através da metodologia do PRA-hsp65 (PCR com Análise de Enzima de Restrição). Para avaliar a concordância entre os diferentes testes foi utilizada a medida Kappa, que apresentou um excelente grau de concordância da PCR multiplex de 100% (Kappa = 1), para todas as espécies que foram utilizadas.A PCR Multiplex, mostrou ser uma ferramenta fácil de executar, rápida, e que possibilitou a amplificação simultânea de mais de uma sequência de DNA alvo em uma única reação, resultando em economia de tempo e de reagentes, na identificação das espécies utilizadas. A PCR multiplex pode representar uma ferramenta alternativa de diagnóstico útil para a identificação laboratorial das micobactérias de interesse médico mais frequentemente isoladas.