Aplicabilidade dos genes Pré-S do virus da Hepatite B (VHB) nos estudos de diversidade genômica

Abstract

O estudo da diversidade genômica e do perfil molecular dos genes pré-S e S em isolados do VHB foi realizado com a utilização de técnicas da PCR (Polymerase chain reaction) e sequenciamento de DNA. Para genotipagem e análises filogenéticas utilizamos 40 amostras do norte e nordeste do Brasil, selecionadas aleatoriamente de pacientes portadores do VHB: 28 pacientes positivos para o AgHBe, na fase aguda da infecção e provenientes de 8alvador-BA; 12 pacientes positivos para o AgHBs, na fase crônica da infecção e provenientes de Rio Branco AC. O DNA do VHB foi detectado por Nested-PCR utilizando-se primers específicos para as regiões pré-S e S. Os produtos amplificados foram seqüenciados e suas seqüências foram analisadas utilizando os programas Phred/phrap e ABI Prism 8EQSCAPE (Applied Biosystems). O alinhamento foi realizado pelo programa ClustalX (v.1.83) e análises filogenéticas foram realizadas pelos programas Mega3 e PAUP. Das 40 amostras oriundas da região norte e nordeste do Brasil, 57,5%(23/40) foram detectáveis por PCR e seqüenciadas. Das amostras provenientes do norte do Brasil verificamos uma diversidade genotípica; com a identificação dos genótipos A (55,6%), D (22,2%) e F (22,2%). Foi demonstrado, também, que na região nordeste, na qual temos poucos estudos dos aspectos genômicos do VHB, a presença do genótipo A (85,7%) e F (14,3%). No estudo destas amostras foram encontrados os seguintes sítios de mutações na região 8 do vírus: P49R, S61L, 186T e L109P, estando esta última na segunda alça imunodominante da proteína 8 (small protein) do envelope viral. Foram identificadas, também, mutações na região pré-S: G02E, Y129H, A79L, e a mutação 885P no elemento regulatório da região promotora do gene S (AgHBs); A mudança do nucleotídeo ocorreu sempre na primeira ou segunda posição do códon, reforçando a hipótese de seleção positiva. Estes resultados corroboram com estudos de mutações nas regiões pré-S/S do VHB e evidenciam a necessidade de se estabelecer uma vigilância molecular com o intuito de identificar a prevalência de mutações nas diversas regiões brasileiras, buscando relacioná-las aos genótipos circulantes diferentes formas de evolução da doença e impacto da vacina. A detecção de mutantes do AgHBs pode, ainda, ser extremamente útil para testes diagnósticos do VHB em doadores de sangue e órgãos.