Isolamento, caracterização fenotípica e molecular e perfil de suscetibilidade de cronobacter spp. em saladas prontas para o consumo e alimentos da culinária japonesa

Abstract

O gênero Cronobacter pertencente à família Enterobacteriaceae, são considerados microorganismos oportunistas, podendo causar meningite, enterocolite necrosante e bacteremia/septicemia em neonatos; e infecções pulmonares, urinárias e outras em idosos, indivíduos imunossuprimidos ou com alguma doença prévia. Esta bactéria pode ser isolada a partir de diversos produtos alimentícios, incluindo alimentos prontos para o consumo. Este trabalho teve como objetivo pesquisar Cronobacter spp. em alimentos prontos para o consumo (alimentos provenientes da culinária japonesa e saladas) oriundas do comércio do município do Rio de Janeiro. No total, foram analisadas 60 amostras utilizando a metodologia de enriquecimento-seletivo descrita na ISO 22964:2017. As colônias suspeitas foram isoladasno Chromogenic Cronobacter Isolation Agar (CCI) e a confirmação dos isolados foi realizada no sistema semi-automatizado Vitek 2.0. A identificação molecular do gênero Cronobacter foi realizada por reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) com alvo no gene dnaG. A identificação das espécies se deu através do protocolo de reação em cadeia da polimerase múltipla (M-PCR) com alvo no gene cgcA e sequenciamento do gene fusA. Os isolados foram submetidos ao teste de suscetibilidade aos antimicrobianos (n=12), utilizando o método de difusão em ágar segundo os critérios do Clinical & Laboratory Standards Institute (CLSI). Trinta isolados de 28 amostras foram identificados como Cronobacter spp. através de qPCR e destas, 29 foram identificadas como “Cronobacter sak group” pelo Vitek 2.0, pois uma cepa (INCQS00786) foi identificada como “Enterobacter spp.”. Após o sequenciamento do gene fusA, 18 (62,1%) cepas foram identificadas como C. sakazakii, oito (27,6%) como C. malonaticus e três (10,3%) como C. dublinensis. Foram identificados 11 alelos distintos, incluindo o alelo fusA 172 identificado neste estudo e incluído no banco de dados. A cepa INCQS00786 foi identificada como Enterobacter spp. e apresentou um alelo novo (fusA 168) que foi incluído no banco de dados. Foi constatado 10 resultados errôneos na identificação das espécies de Cronobacter com o uso da técnica M-PCR comparada com o sequenciamento do alelo fusA, atualmente considerada uma técnica padrão ouro para identificação das espécies do gênero. Quanto ao perfil de suscetibilidade, 25 cepas (86,2%) foram sensíveis a todos os antimicrobianos testados. Dois (6,9%) isolados de C. malonaticus apresentaram resistência ao ácido nalidíxico, dois (6,9%) isolados de C. sakazakii apresentaram resistência à tetraciclina, um (3,4%) isolado de C. malonaticus apresentou resistência ao aztreonam e um (3,4%) isolado de C.sakazakii apresentou resistência à ampicilina-sulbactam. Conclui-se que os alimentos provenientes da culinária japonesa e saladas prontas para o consumo podem apresentar contaminação por Cronobacter, e algumas cepas podem apresentar resistência a diferentes grupos de antimicrobianos. As Agências de Vigilância Epidemiológica e Sanitária devem realizar uma análise de risco de forma a avaliar o risco que esses alimentos possam representar se ingeridos por indivíduos do grupo de risco, como idosos e imunossuprimidos.