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Title: Proposta de substituição do ensaio de pirogênio (in vivo) pelo ensaio do lal (método cromogênico cinético - in vitro) no controle de qualidade dos soros anticrotálico, antiescorpiônico, antirrábico e antitetânico
Advisor: Zamith, Helena Pereira da Silva
Members of the board: Abrantes, Shirley de Mello Pereira
Silva, Marco Antônio Mota da
Almeida, Antônio Eugênio Castro Cardoso
Authors: Fingola, Fernando Faria
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract: A validação do ensaio do LAL (método cromogênico cinético) para os soros anticrotálico (SAC), antirrábico (SAR), antitetânico (SAT) e antiescorpiônico (SAE) envolveu a determinação de parâmetros requeridos pela. Agência Nacional de Vigilância Sanitária Brasileira (ANVISA), o FDA (Food and Drug Administration), USP (United States Pharmacopeia, 39) e o ICH (International Conference on Harmonization). Em todos os experimentos, o coeficiente de correlação da curva obtida com o controle padrão de endotoxina (CSE; Escherichia coli 055:B5) ficou entre −0,980 a −1,000. No teste de Inibição/Potencialização, a recuperação da endotoxina adicionada às amostras de SAC, SAR, SAT e SAE, nas diluições de trabalho (1:10; 1:10; 1:10 e 1;100 respectivamente) cumpriram com o critério de recuperação exigidos pelo FDA, USP e ANVISA. O método demonstrou ser seletivo para detecção de endotoxina. A repetibilidade apresentou um baixo coeficiente de variação (CV %). SAC (0,25; 1,22 e 0,29 %), SAR ( 0,38; 0,64 e 0,33 %), SAT (1,22; 1,15 e 0,56 %) e SAE (0,91; 0,30 e 0,93 %). Na avaliação da precisão intermediária foram realizadas, para o cálculo do CV%, 12 determinações para cada analista (1 e 2). Para a exatidão foram realizadas 9 determinações em 3 concentrações de endotoxina (0,05; 0,5 e 5 EU/mL) para avaliarmos a recuperação do analito nas amostras de soros. Para o SAC o CV% foi de 2,0% e 1,20% (analistas 1 e 2 respectivamente). A recuperação foi de 75,4%, 95% e 92% respectivamente para as concentrações de (0,05; 0,5 e 5 EU/mL). Para o SAR o CV% foi de 0,96% e 0,78% (analistas 1 e 2 respectivamente). A recuperação foi de 78%, 100,4% e 94% respectivamente para as concentrações de (0,05; 0,5 e 5 EU/mL). Para o SAT o CV% foi de 1,73% e 1,80% (analistas 1 e 2 respectivamente). A recuperação foi de 76%, 96,4% e 122,2% respectivamente para as concentrações de (0,05; 0,5 e 5 EU/mL). Para o SAE o CV% foi de 1,47% e 3,6% (analistas 1 e 2 respectivamente). A recuperação foi de 85,4%, 93,8% e 106,6% respectivamente para as concentrações (0,05; 0,5 e 5 EU/mL). A validação da metodologia, para os quatro soros analisados, cumpriu os critérios para todos os parâmetros de desempenho requeridos.
Abstract: The validation of the LAL test (chromogenic kinetic method) for the anti-crotalic(SAC), anti- rabies (SAR), anti-tetanus (SAT) and anti-scorpion (SAE) serums met every criteria required by the Brazilian National Health Surveillance Agency (ANVISA), the FDA (Food and Drug Administration), USP (United States Pharmacopeia, 39) and the ICH (International Conference on Harmonization).In every experiment, the correlation between the obtained curve with the standard endotoxin control (CSE; Escherichia coli 055:B5, ranging of 0,0005-50EU/mL) goes from -0,980 to -1,0000. On the Inhibition/Potentialization test, the endotoxin recovery added to the SAC, SAR, SAT and SAE samples, midpoint of the curve (0,5 EU/mL), in the working dilutions (1:10; 1:10; 1:10 and 1:100 respectively) fulfilled its criteria (i.e., 50-200% demanded by the FDA and USP, and 100% +- 30% by ANVISA).The method proved to be selective for the endotoxin detection. The repeatability showed low coefficient of variation (CV%). SAC (0,25; 1,22 and 0,29%), SAR (038; 0,64 and 0,33%), SAT (1,22; 1,15 and 0,56%) e SAE (0,91; 0,30 and 0,93%).In the intermediate precision evaluation, for the CV% calculous, 12 determinations for each analyst (1 and 2) were performed. In order to obtain accuracy, 9 determinations in 3 endotoxin concentrations (0,05; 0,5; and 5EU/mL) were executed so as to evaluate the analyte recuperation in the serum samples. For SAC, the CV% was 2,0% and 1,20% (analysts 1 and 1, respectively). The recovery was 75,4%, 95% and 92% also respectively for the concentrations 0,05; 0,5 and 5 EU/mL. To SAR, the CV% was 0,96% and 0,78% (analysts 1 and 2, respectively). The recovery was 78%, 100,4% and 94% respectively for the concentrations 0,05; 0,5 and 5 EU/mL. To SAT, the CV% was 1,73% and 1,80% (analysts 1 and 2, respectively). The recovery was 76%, 96,4% and 122,2% respectively for the concentrations 0,05; 0,5 and 5 EU/mL. To SAE, the CV% was 1,47% and 3,6% (analysts 1 and 2, respectively). The recovery was 85,4%, 93,8% and 106,6% respectively for the concentrations 0,05; 0,5 and 5 EU/mL.The validation of this methodology, for all the four serums analyzed, fulfilled the criteria for every performance parameter required.
Keywords: Endotoxin
LAL Chromogenic Kinetic
Endotoxin Limit Concentration
Method Validation
CV%
Recover
keywords: Endotoxina
LAL Cromogênico Cinético
Concentração limite de endotoxina
Recuperação
Validação de métodos
CV%
DeCS: Endotoxinas
Estudos de Validação
Vigilância Sanitária
Issue Date: 2018
Citation: FINGOLA, F. F. Proposta de substituição do ensaio de pirogênio (in vivo) pelo ensaio do lal (método cromogênico cinético - in vitro) no controle de qualidade dos soros anticrotálico, antiescorpiônico, antirrábico e antitetânico. 2018. 117 f. Tese (Doutorado em Vigilância Sanitária)-Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde, Fundação Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, 2018.
Date of defense: 2018
Place of defense: Rio de Janeiro/RJ
Department: Coordenação de Pós Graduação
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde
Program: Programa de Pós-Graduação em Vigilância Sanitária
Copyright: open access
Appears in Collections:INCQS - Teses de Doutorado

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