Proposta de substituição do ensaio de pirogênio (in vivo) pelo ensaio do lal (método cromogênico cinético - in vitro) no controle de qualidade dos soros anticrotálico, antiescorpiônico, antirrábico e antitetânico

Abstract

A validação do ensaio do LAL (método cromogênico cinético) para os soros anticrotálico (SAC), antirrábico (SAR), antitetânico (SAT) e antiescorpiônico (SAE) envolveu a determinação de parâmetros requeridos pela. Agência Nacional de Vigilância Sanitária Brasileira (ANVISA), o FDA (Food and Drug Administration), USP (United States Pharmacopeia, 39) e o ICH (International Conference on Harmonization). Em todos os experimentos, o coeficiente de correlação da curva obtida com o controle padrão de endotoxina (CSE; Escherichia coli 055:B5) ficou entre −0,980 a −1,000. No teste de Inibição/Potencialização, a recuperação da endotoxina adicionada às amostras de SAC, SAR, SAT e SAE, nas diluições de trabalho (1:10; 1:10; 1:10 e 1;100 respectivamente) cumpriram com o critério de recuperação exigidos pelo FDA, USP e ANVISA. O método demonstrou ser seletivo para detecção de endotoxina. A repetibilidade apresentou um baixo coeficiente de variação (CV %). SAC (0,25; 1,22 e 0,29 %), SAR ( 0,38; 0,64 e 0,33 %), SAT (1,22; 1,15 e 0,56 %) e SAE (0,91; 0,30 e 0,93 %). Na avaliação da precisão intermediária foram realizadas, para o cálculo do CV%, 12 determinações para cada analista (1 e 2). Para a exatidão foram realizadas 9 determinações em 3 concentrações de endotoxina (0,05; 0,5 e 5 EU/mL) para avaliarmos a recuperação do analito nas amostras de soros. Para o SAC o CV% foi de 2,0% e 1,20% (analistas 1 e 2 respectivamente). A recuperação foi de 75,4%, 95% e 92% respectivamente para as concentrações de (0,05; 0,5 e 5 EU/mL). Para o SAR o CV% foi de 0,96% e 0,78% (analistas 1 e 2 respectivamente). A recuperação foi de 78%, 100,4% e 94% respectivamente para as concentrações de (0,05; 0,5 e 5 EU/mL). Para o SAT o CV% foi de 1,73% e 1,80% (analistas 1 e 2 respectivamente). A recuperação foi de 76%, 96,4% e 122,2% respectivamente para as concentrações de (0,05; 0,5 e 5 EU/mL). Para o SAE o CV% foi de 1,47% e 3,6% (analistas 1 e 2 respectivamente). A recuperação foi de 85,4%, 93,8% e 106,6% respectivamente para as concentrações (0,05; 0,5 e 5 EU/mL). A validação da metodologia, para os quatro soros analisados, cumpriu os critérios para todos os parâmetros de desempenho requeridos.