Controle da estabilidade de lotes de staphylococcus aureus e pseudomonas aeruginosa da coleção de microrganismos de referência em vigilância sanitária: CMRVS do INCQS/FIOCRUZ

Abstract

Materiais de referência são definidos na ABNT ISO GUIA 30:2011 como materiais suficientemente homogêneos e estáveis com relação a uma ou mais propriedades específicas, estabelecidas, que justificam sua utilização numa medição ou exame qualitativo. São empregados para dar suporte a grandezas e a propriedades qualitativas e, quando certificados, podem ser utilizados no controle da precisão ou na avaliação de métodos de medição. Na área da microbiologia destacam-se os microrganismos de referência que podem ser utilizados no controle de qualidade de análises microbiológicas de produtos e insumos de saúde, como padrões em ensaios de identificação fenotípica e molecular de microrganismos, dentre outras atividades. Estes microrganismos são mantidos e fornecidos por coleções de cultura de referência, como a Coleção de Microrganismos de Referência em Vigilância Sanitária (CMRVS) do INCQS - FIOCRUZ. Na CMRVS as cepas são preservadas, principalmente, pelo processo da liofilização que é um método de preservação capaz de manter a integridade da maioria dos microrganismos por períodos prolongados. Estas cepas são regularmente fornecidas para instituições públicas e privadas e assim, demandam a produção de novos lotes a partir de cepas originais. Os novos lotes devem ser produzidos e preservados sob rigoroso controle de qualidade, a fim de conservar a viabilidade e características bioquímicas, morfológicas e genéticas. Os procedimentos de preparo podem gerar contaminação microbiana e/ou alterações genéticas das culturas que inviabilizam um lote. O objetivo desse estudo foi avaliar onze lotes de Staphylococcus aureus INCQS00039 (ATCC 6538) e dez lotes de Pseudomonas aeruginosa INCQS00025 (ATCC 15442) em relação a viabilidade, pureza, identidade fenotípica e genotípica e autenticidade genética. A viabilidade foi determinada pelo método “Spread Plate” e a identidade fenotípica por provas bioquímicas convencionais e automatizadas (VITEK 2). A identificação genotípica e a autenticidade dos microrganismos de referência ocorreram através da utilização de métodos moleculares, dentre eles: a amplificação dos espaços entre os genes codificadores de tRNA pela PCR (tDNA-PCR), a amplificação dos espaços entre os genes 16S-23S do operon de rRNA (ITS-PCR) e entre as sequências consenso repetitivas de enterobactérias (ERIC-PCR). Dentre os 21 lotes das duas espécies analisadas, cinco não foram viáveis e dentre os lotes que apresentaram crescimento, a concentração de células variou de 1012 a 105 UFC/mL, sendo a maior queda de concentração apresentada por um lote de P. aeruginosa. A identificação automatizada apresentou variações bioquímicas entre o primeiro e o último lote das duas espécies analisadas. Quatro lotes de P. aeruginosa apresentaram colônias com morfologias distintas. No entanto, tanto os lotes com perfis bioquímicos diferentes como aqueles contendo colônias com morfologias diferenciadas apresentaram perfis de bandas idênticos pela tDNA-PCR e ERIC-PCR, descartando a presença de contaminantes. Os resultados obtidos nos permitem concluir que os lotes não viáveis podem ter sofrido efeitos deletérios durante o processo de armazenamento e que as variações das atividades bioquímicas encontradas entre os lotes mais antigos e mais recentes alerta para a necessidade da verificação das características analisadas no estudo. Ainda assim, a maioria dos lotes produzidos pela CMRVS apresentaram condições satisfatórias em relação à identidade, viabilidade e pureza, o que reflete a qualidade do trabalho realizado pela mesma.