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Title: Sensitivity of polymerase chain reaction for detection of known aliquots of Trypanosoma cruzi in the blood of mice: an in vitro study.
Other Titles: Sensibilidade da reação em cadeia da polimerase para a detecção de alíquotas conhecidas do Trypanosoma cruzi no sangue da camundongos: estudo in vitro
Authors: Campos, Rozalia Mendes Figueira
Magalhães, Juracy Barbosa
Reis, Eliana Almeida Gomes
Reis, Mitermayer Galvão dos
Andrade, Sonia Gumes
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil
Abstract: A sensibilidade da reação em cadeia da polimerase (PCR) para revelar a presença de números conhecidos de tripomastigotas no sangue de camundongos, foi investigada em três experimentos separados. No primeiro, foram adicionados 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20 e 50 tripomastigotas respectivamente, em oito amostras de 500μl de sangue de camundongo. No 2o e 3o experimentos: foram feitas 10 amostras contendo 1, e 10 amostras contendo 2 tripomastigotas/500μl de sangue. Controle positivo: 500μl de sangue contendo 100.000 trypomastigotas. Para amplificação dos minicirculos do kDNA pela PCR foram usados os iniciadores S35 e S36. A PCR revelou produtos de 330 p.b nos controles positivos e nas amostras contendo de 3 a 50 tripomastigotas. Quando apenas uma amostra contendo 1 ou 2 tripomastigotas foi examinada, os resultados foram negativos, porém no 2o e 3o experimentos 9/10 amostras contendo 1 e 2 tripomastigotas foram PCR positivas, revelando alta sensibilidade da reação. Em conclusão, a presença de um só parasito em 500μl de sangue é suficiente para uma PCR positiva e este método pode ser usado como complementação dos demais testes parasitológicos de cura, em camundongos tratados, quando pequenos volumes de sangue são individualmente examinados.
Abstract: To evaluate the sensitivity of polymerase chain reaction (PCR) to reveal known number of trypomastigote in the blood of mice, three separate experiments were done. First: To eight samples of 500μl of normal mice blood, one aliquot of 1, 2, 3, 4, 5, 10, and 50 trypomastigotes respectively, were added. Second and third: 10 aliquots with 1 and 10 with 2 trypomastigotes were added to samples of 500μl of normal mice blood. Positive control: 500μl of blood containing 100,000 trypomastigotes. For kDNA minicircles amplification by PCR the primers:S35 and S36 were used. PCR revealed products of 330 b.p in the positive controls. When only one sample with the aliquots of 1 or 2 trypomastigotes was examined, results were negative; results were positive with aliquots of 3 to 50 trypomastigotes. In the 2nd and 3rd experiments, 9/10 aliquots with one parasite and 9/10 with 2 trypomastigotes were positive revealing a high sensitivity of this reaction. In conclusion, the presence of one single parasite in 500μl of blood, is enough for a positive PCR. This method could be used as a complement to the various parasitological cure tests in treated mice, when low volumes of blood are individually examined
Keywords: Trypanosoma cruzi
Polymerase chain reaction
PCR sensitivity in mice
PCR as cure test in mice
keywords: Trypanosoma cruzi
Reação em cadeia da polimerase
Sensibilidade da PCR em camundongos
PCR como teste de cura
DeCS: Reação em Cadeia da Polimerase
Trypanosoma cruzi/isolamento & purificação
Animais
DNA de Cinetoplasto/sangue
Camundongos
Sensibilidade e Especificidade
Issue Date: 2002
Citation: CAMPOS, R.F. et al. Sensitivity of polymerase chain reaction for detection of known aliquots of Trypanosoma cruzi in the blood of mice: an in vitro study. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, v. 35, n. 5, p. 487-90, sep./oct. 2002.
ISSN: 0037-8682
Copyright: open access
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