Refinamento para os ensaios de potência de soro antidiftérico e componente diftérico em vacinas: estabelecimento de escores clínicos para implementação de ponto final humanitário

Abstract

A Farmacopeia Brasileira ainda preconiza ensaios de letalidade para a determinação da potência do soro antidiftérico e do componente diftérico em vacinas combinadas. No entanto, ensaios de letalidade promovem intensa dor e sofrimento aos animais. O refinamento destes métodos pode ser obtido por meio da implementação de um desfecho humanitário, identificando parâmetros clínicos que assegurem que o animal atingiu o ponto final do ensaio, possibilitando a realização da eutanásia antes do agravamento dos sintomas. A nova abordagem deve garantir a correta identificação da eficácia dos produtos com base na potência obtida. Com o objetivo de refinar a metodologia de soroneutralização in vivo utilizada no INCQS, realizou-se o monitoramento de diversos parâmetros clínicos nas cobaias (Cavia porcellus) durante a realização de ensaios de rotina, para identificar as alterações clínicas mais promissoras para o estabelecimento de escores que possam ser utilizados na determinação do ponto final humanitário. Foram avaliados sinais clínicos associados à dor em outras espécies animais, evolução do peso e temperatura retal, desde o fornecimento dos animais até o término do ensaio ou óbito. Para a avaliação dos sinais clínicos foram elaborados escores: 0 (ausente/sem alteração); 1 (levemente presente ou alterado) e 2 (marcadamente presente ou alterado), além de registros em fotos e vídeos. Foram avaliadas 470 cobaias de 250-350g. Os animais foram classificados de acordo com o desfecho no ensaio de soroneutralização: vivo (Protegido; n=310), óbito (Não-protegido; n=144) e animais inoculados apenas com salina (controle negativo;n=16). Após análises estatísticas, parâmetros como contração do flanco, coloração e enrijecimento do abdômen, postura corporal/arqueamento do dorso, aspecto do nariz/parede lateral da cavidade oral e posicionamento de orelhas e vibrissas apresentaram uma eficácia limitada em identificar corretamente os animais que não sobreviveram aos ensaios. Os parâmetros que revelaram maior eficiência na previsão da letalidade dos animais considerados não protegidos nos referidos ensaios foram: redução do peso corporal, da temperatura retal, do grau de atividade na gaiola, do grau de abertura ocular e aspecto da pelagem (pelos arrepiados e desalinhados). Padrões de alterações faciais, comumente utilizadas em outras espécies, não foramobservadas nas cobaias expostas à toxina diftérica não-neutralizada. O modelo preliminar de predição, utilizando o compilado dos escores dos parâmetros significativos, também apresentou um bom desempenho, superando as previsões dos parâmetros isolados. O estudo destaca a viabilidade de diretrizes éticas para o uso de escores clínicos para determinação de um ponto final humanitário, em substituição ao desfecho baseado na letalidade, impactando positivamente no bem-estar animal em ensaios de potência in vivo para o controle da qualidade de vacinas contra difteria e soros antidiftéricos utilizados do Programa Nacional de Imunizações.