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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/67216
BUSCA DA ATIVIDADE ANTIVIRAL DE EXTRATOS VEGETAIS E FÚNGICOS, PRODUTOS NATURAIS E SINTÉTICOS CONTRA O VÍRUS SELVAGEM DA FEBRE AMARELA
vírus selvagem da febre amarela
produto natural
triagem
forskolin
fracionamento biomonitorado
wild yellow fever viruS
natural produc
Screening
forskolin
bioguided fractionation
Produtos Naturais/ isolamento & purificação.
Fracionamento Químico/método
Monitoramento biológico
Vírus da Febre Amarela/efeito dos fármacos
Colforsina/administração & dosagem
Souza, Eliza Flores de | Date Issued:
2023
Author
Advisor
Co-advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brazil.
Abstract in Portuguese
A vacina contra a febre amarela está disponível há anos, entretanto, surtos da doença ainda ocorrem mundialmente principalmente devido à baixa cobertura vacinal em várias áreas endêmicas. Algumas substâncias já foram descritas como ativas contra o vírus da febre amarela (YFV), entretanto, não existe nenhum fármaco específico para tratar pacientes infectados, que evoluindo para a fase tóxica da doença apresenta alta taxa de mortalidade. Cientes da necessidade e urgência para o desenvolvimento de antivirais contra o YFV, o objetivo desse estudo foi identificar a atividade in vitro a partir da triagem de 183 extratos brutos de plantas e fungos coletados no Brasil e continente Antártico. Para isso, células Vero-CCL81 foram infectadas com um YFV selvagem (wt-YFV), isolado de paciente hospitalizado, e tratadas com extrato bruto na concentração de 20 mg/mL (DMSO aq). A atividade antiviral e citotóxica dos extratos foi verificada pelo método observacional em microscópio óptico do efeito citopático (ECP) e método colorimétrico do MTT. Dez extratos testados (5,5%) apresentaram atividade contra wt-YFV. Para identificar substâncias ativas contra o vírus, o extrato de bulbo de Hippeastrum puniceum foi submetido ao fracionamento biomonitorado, por meio de cromatografia líquida de ultra alta performance acoplada a espectrometria de massas. A partir da análise das frações ativas foram anotadas várias substâncias como, trigonelina, bulbisina, ácido tetrahidroharman-3-carboxílico, 2,7-dimetoxihomolicorina e 3-O-acetilnarcissidina, cuja atividade contra o wt-YFV será investigada. Nesse trabalho, oito substâncias sintéticas e quarenta produtos naturais (PN) puros, selecionados baseado em propriedades antivirais relatadas na literatura ou de forma aleatória, foram testados contra o wt-YFV. Para isso, células Vero infectadas foram tratadas com dez concentrações distintas das substâncias, para a determinação de suas concentrações citotóxica 50 (CC50), concentração efetiva 50 (CE50) e índice de seletividade (IS) contra o wt-YFV. A forskolina, um PN (Coleus forskohlii -Lamiaceae), mostrou atividade inédita anti wt-YFV com IS > 8. Até o momento, a atividade antiviral da forskolina foi descrita apenas contra vírus Coxsackie e SARS-CoV. Posteriormente, o mecanismo de ação antiviral da forskolina contra o YFV será investigado.
Abstract
Although the yellow fever vaccine has been available since the last century, outbreaks of this disease still occur worldwide mainly due to low vaccination coverage in several endemic areas, predominantly in Latin America and Africa. Some substances have already been described as active against the yellow fever virus (YFV), however, there is no specific drug for the treatment of infected patients, who can progress to the toxic phase of the disease that has a high mortality rate. Aware of the need and urgency for the development of antivirals against YFV, the objective of this study was to identify the in vitro activity from the screening of approximately two hundred crude extracts of plants belonging to different families and of fungi collected in Brazil and the continent Antarctic. For this, Vero-CCL81 cells were infected with a wild-type YFV (wt-YFV), isolated from a hospitalized patient, and treated with a crude extract solution at a concentration of 20 mg/mL (aq DMSO). The antiviral and cytotoxic activity of the extracts was verified by the observational method in an optical microscope of the cytopathic effect (CPE) and by the MTT colorimetric method. Ten of the 183 extracts tested (5.5%) showed activity against wt-YFV. In order to identify active substances against the virus, the Hippeastrum puniceum bulb extract was subjected to biomonitored fractionation, using ultra high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry. From the analysis of the 4 active fractions, several substances were noted, such as trigonelline, bulbisine, tetrahydroharman-3-carboxylic acid, 2,7-dimethoxyhomolychorine and 3-O-acetylnarcissidine, whose activity against wt-YFV could be investigated. In this work, eight synthetic substances and forty pure natural products (NP), selected based on antiviral properties reported in the literature or randomly, were tested against wt-YFV. For this, infected Vero cells were treated with ten different concentrations of the substances, for the determination of their respective cytotoxic concentration 50 (CC50), effective concentration 50 (EC50) and selectivity index (IS) against wt-YFV. Forskolin, a diterpene produced by Coleus forskohlii (Lamiaceae), showed unprecedented activity against YFV with IS > 8. So far, the antiviral activity of forskolin has only been described against Coxsackie virus and SARS-CoV. Subsequently, the mechanism of antiviral action of forskolin against YFV will be investigated.
Keywords in Portuguese
Atividade antiviralvírus selvagem da febre amarela
produto natural
triagem
forskolin
fracionamento biomonitorado
Keywords
Antiviral activitwild yellow fever viruS
natural produc
Screening
forskolin
bioguided fractionation
DeCS
Antiviral/isolamento & purificação.Produtos Naturais/ isolamento & purificação.
Fracionamento Químico/método
Monitoramento biológico
Vírus da Febre Amarela/efeito dos fármacos
Colforsina/administração & dosagem
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