Please use this identifier to cite or link to this item: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/6980
Title: Epítopos de linfócitos T CD8+ contidos na região COOH-terminal de cisteína proteinase B de Leishmania (Leishmania) amazonensis
Advisor: Alves, Carlos Roberto
Members of the board: Pereira, Mirian Claudia de Souza
Cavalcanti Júnior, Geraldo Barroso
Silva Júnior, Floriano Paes
Authors: Silva, Franklin Souza da
Coadvisor: Caffarena, Ernesto Raul
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil
Abstract: Leishmania spp são modelos de parasitas intracelulares de macrófagos que apresentam uma série de peculiaridades adaptativas nesta fase do seu ciclo biológico. A nossa hipótese é que fragmentos peptídicos da região COOH-terminal das cisteínas proteinases B de Leishmania (Leishmania) amazonensis atuem como uma dessas peculiaridades, modulando a resposta imune do hospedeiro vertebrado. Nesse trabalho, propomos definir a região bioativa (fragmento peptídico indutor da resposta imune) de dois peptídeos descritos como imunomoduladores durante a infecção experimental por L. (L.) amazonensis. Utilizando o servidor online SYFPEITHI, a partir dos peptídeos P1 (VMVEQVICFD) e P6 (EFCLGGGLCL) foi possível triar sequências peptídicas (P6.1 FCLGGGLCL, P6.2 EFCLGGGLCL, P6.3 EFCLGGGL, P6.4 CLGGGLCL, P6.5 EFCLGGGLC, P6.6 FCLGGGLC, P1.7 VMVEQVICF, P1.8 VMVEQVICFD, P1.9 MVEQVICFD, P1.10 VEQVICFD) que apresentaram um potencial de ligação favorável (escore > 8) aos dímeros de H-2 (H-2Db, H-2Kd, H-2Kk e H-2Ld). Os epítopos preditos foram sintetizados quimicamente e utilizados em ensaios ex vivo e in vitro com as linhagens de camundongos C57BL/6 (H-2Db) e BALB/c (H-2Ld). Os ensaios de quantificação dos linfócitos T CD8+ com o dimeric, H2-Db:Ig e H2-Ld:Ig complexadas aos peptídeos previstos, indicaram a presença de clones deste tipo celular para todos os peptídeos previstos, exceto para o P6.5 na linhagem C57BL/6, nos linfonodos drenantes da infecção. A propriedade de induzir proliferação de linfócitos T CD8+ in vitro foi observada apenas para sete peptídeos previstos (P6.1, P6.3, P6.4, P6.5, P6.6 P1.8 e P1.10) nos ensaios com BALB/c e apenas dois epítopos (P1.7 e P1.10) nos ensaios com C57BL/6. Adicionalmente foram realizados ensaios de interação entre o H2-Db:Ig e H2-Ld:Ig e os peptídeos sintéticos, em tempo real, pela técnica de ressonância plasmônica de superfície. Os peptídeos testados com H-2Db (P6.1, P6.3, P6.4, P6.5, P6.6, P1.7, P1.8 e P1.10) e H-2Lb (P6.2, P6.3, P6.4, P6.5, P6.6 e P1.8 e P1.9) indicaram valores de Ka (~ 10+1-10+3 M-1 s-1) e de Kd ( ∼ 10-4 s-1 - 10-6 s-1) favoráveis para formar complexos com os dímeros H-2Db e H-2Lb em pH neutro. Os valores de G < 0 destes complexos (em ambos os haplotipos), sugeriram que os mesmos existam durante a resposta imune acarretada pela infecção por L. (L.) amazonensis em camundongos.
Abstract: Leishmania spp are models of intracellular macrophage parasites that show several adaptive peculiarities during that particular phase of the biological cycle. We hypothesized that peptide fragments from the COOH-terminal region of a cysteine proteinase B from Leishmania (Leishmania) amazonensis act in such peculiar way by modulating the immune response of vertebrate hosts. The aim of this work is the determination of the bioactive region (peptide fragment inducer of immune response) of two peptides described as immunomodulating during experimental infection by L. (L.) amazonensis. Using the online server Syfpeithi for P1(VMVEQVICFD) and P6(EFCLGGGLCL) peptides, we selected short sequences (P6.1 FCLGGGLCL, P6.2 EFCLGGGLCL, P6.3 EFCLGGGL, P6.4 CLGGGLCL, P6.5 EFCLGGGLC, P6.6 FCLGGGLC, P1.7 VMVEQVICF, P1.8 VMVEQVICFD, P1.9 MVEQVICFD, P1.10 VEQVICFD) with favorable binding potential (score > 8) to H-2 dimmers (H-2Db, H-2Kd, H-2Kk and H-2Ld). The predicted epitopes were chemically synthesized and used for ex vivo and in vitro assays with isogenic mice C57BL6 (H-2Db) and BALB/C (H-2Ld). We have also performed a quantification assay of CD8+ T lymphocytes in draining lymph node from lesion. In this assay, we used dimeric, H2-Db:Ig and H2-Ld:Ig, complexed to predicted peptides. The results indicated the presence of CD8+ T lymphocytes clones, for all tested peptides, excep for P6.5 in C57BL/6 mice. The capacity to induce CD8+ T lymphocytes blastogenesis, in vitro, was only observed for seven predicted peptides (P6.1, P6.3, P6.4, P6.5, P6.6 P1.8 and P1.10) in the assay with BALB/c mice cells and only for two peptides (P1.7 and P1.10) in C57BL/6 mice cell assay. Additionally, we performed a binding assay between H2-Db:Ig and H2-Ld:Ig and the synthetic peptides, in real time, by surface plasmon resonance. The peptides tested with H-2Db (P6.1, P6.3, P6.4, P6.5, P6.6, P1.7, P1.8 and P1.10) and H-2Lb (P6.2, P6.3, P6.4, P6.5, P6.6, P1.8 and P1.9) indicated values of Ka (~ 10+1-10+3 M-1 s-1) and Kd (∼ 10-4 s-1 - 10-6 s-1 ) favorable to form complexes with H-2Db e H-2Lb dimmers at neutral pH. The G < 0 values of these complexes (for both haplotypes), suggest that they can exist during the immune response caused by L. (L.) amazonensis infection in mice.
DeCS: Linfócitos T CD8-Positivos
Doenças Negligenciadas
Leishmania mexicana
Epitopos
Issue Date: 2010
Publisher: Instituto Oswaldo Cruz
Citation: SILVA, Franklin Souza da. Epítopos de linfócitos T CD8+ contidos na região COOH-terminal de cisteína proteinase B de Leishmania (Leishmania) amazonensis. 2010. 75f. Dissertação (Mestrado em Biologia Computacional e Sistemas) – Fundação Oswaldo Cruz, Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2010.
Date of defense: 2010-04-30
Place of defense: Rio de Janeiro/RJ
Department: Pós-Graduação em Biologia Computacional e Sistemas
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz
Program: Programa de Pós-Graduação em Biologia Computacional e Sistemas
Copyright: open access
Appears in Collections:IOC - PGBCS - Dissertações de Mestrado

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
franklin_silva_ioc_mest_2010.pdf1.97 MBAdobe PDFThumbnail
    Request a copy


FacebookTwitterDeliciousLinkedInGoogle BookmarksBibTex Format mendeley Endnote DiggMySpace

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.