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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/70188
DOENÇA DE CHAGAS NO ESTADO DE PERNAMBUCO: UMA ABORDAGEM MOLECULAR SOBRE O DIAGNÓSTICO DAS DIFERENTES FASES DA INFECÇÃO E DE ACOMPANHAMENTO PÓS TRATAMENTO ETIOLÓGICO
Trypanosoma cruzi
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real
Oliveira, Cíntia Nascimento da Costa | Date Issued:
2024
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Abstract in Portuguese
A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi), é um importante problema de saúde pública. Existem técnicas diagnósticas específicas para cada uma das duas fases da doença, mas estudos recomendam à busca por outras metodologias tanto para o diagnóstico, como para o acompanhamento pós tratamento antiparasitário. O presente trabalho avaliou a aplicabilidade da PCR quantitativa em tempo real (qPCR) para diagnóstico da doença de Chagas crônica em amostras suspeitas, procedentes de hospitais, centros médicos e Secretarias Municipais de Saúde do Estado de Pernambuco, bem como em amostras coletadas para o acompanhamento terapêutico dos indivíduos submetidos ao tratamento após surto da doença de Chagas ocorrido em 2019, e amostras de pacientes crônicos com suspeita de reagudização da infecção, que passariam por transplante de órgãos, foram encaminhados a partir do Instituto de Medicina Integral Professor Fernando Figueira (IMIP), recebidas por livre demanda pelo Serviço de Referência em Doença de Chagas (SRDC – IAM/Fiocruz). Amostras de indivíduos com testes sorológicos negativos para a infecção por T. cruzi foram utilizadas como controle negativo. O sistema de primers TcSAT-IAM, que tem por alvo o DNA satélite (SAT-DNA) de T. cruzi, foi utilizado. O sistema foi aplicado ainda em amostras extraídas a partir de hemoculturas, e os resultados foram comparados entre as técnicas. Para o diagnóstico da fase crônica 310 amostras foram testadas, e os resultados indicaram concordância mínima entre os testes, com sensibilidade, especificidade e acurácia de 12,84%, 100% e 58,39%, respectivamente, sendo os resultados concordantes com a literatura, que destaca a dificuldade de estabelecer um diagnóstico molecular para esta fase da doença. Para o acompanhamento pós-terapêutico de indivíduos tratados na fase aguda, a qPCR teve resultados negativos, demonstrando sua aplicabilidade para avaliar falha terapêutica. Para o acompanhamento pós-transplante, a qPCR detectou o DNA parasitário em 10 dos 11 casos avaliados, sendo capaz de identificar a reagudização da infecção antes dos testes parasitológicos. Em amostras de hemocultura, o diagnóstico ocorreu nas 3 amostras testadas, demonstrando que a associação dessas técnicas aumenta a sensibilidade da qPCR.
Abstract
Chagas disease, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi (T. cruzi), is a major public health problem. There are specific diagnostic techniques for each of the two phases of the disease, but studies recommend the search for other methodologies for both diagnosis and post-antiparasitic treatment monitoring. The present study evaluated the applicability of real-time quantitative PCR (qPCR) for the diagnosis of chronic Chagas disease in suspected samples from hospitals, medical centers, and Municipal Health Departments of the State of Pernambuco, as well as in samples collected for therapeutic monitoring of individuals undergoing treatment after an outbreak of Chagas disease that occurred in 2019, and samples from chronic patients with suspected relapse of the infection who would undergo organ transplantation were sent from the Instituto de Medicina Integral Professor Fernando Figueira (IMIP), received on free demand by the Chagas Disease Reference Service (SRDC - IAM/Fiocruz). Samples from individuals with negative serological tests for T. cruzi infection were used as negative controls. The TcSAT-IAM primer system, which targets T. cruzi satellite DNA (SAT-DNA), was used. The system was also applied to samples extracted from blood cultures, and the results were compared between the techniques. For the diagnosis of the chronic phase, 310 samples were tested, and the results indicated minimal agreement between the tests, with sensitivity, specificity and accuracy of 12.84%, 100% and 58.39%, respectively, with the results being in agreement with the literature, which highlights the difficulty of establishing a molecular diagnosis for this phase of the disease. For the post-therapeutic follow-up of individuals treated in the acute phase, qPCR had negative results, demonstrating its applicability to evaluate therapeutic failure. For post-transplant follow-up, qPCR detected parasitic DNA in 10 of the 11 cases evaluated, being able to identify the re-exacerbation of the infection before parasitological tests. In blood culture samples, the diagnosis occurred in the 3 samples tested, demonstrating that the combination of these techniques increases the sensitivity of qPCR.
Keywords in Portuguese
Doença de ChagasTrypanosoma cruzi
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real
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