Development of a HPLC/MS/MS methodology for determining 3-O-methyldopa in human plasma and its application in a bioequivalence study

Abstract

Uma metodologia específica, simples e sensível baseado em HPLC/MS/MS foi desenvolvida e validada para realizar a determinação de 3-o-metildopa, o principal metabolito da dopamina, em plasma humano. A separação foi realizada em coluna analítica Atlantis T3 C18 (5 μm; 150 x 4,6 mm i.d.), utilizando-se uma fase móvel composta por uma solução de água e metanol (85:15, v/v), e contendo 0,05 % de ácido fórmico. A extração do analito e da amostra padrão interno foi executada utilizando-se uma simples precipitação proteica no plasma com ácido perclórico. A detecção foi realizada por meio de espectrômetro de massa triplo quadrupolo, em modo de monitoramento de reações múltiplas (MRM) positivo. A transição monitorizada foi m/z 212,0 - m/z 166,0 para 3-O-metildopa e m/z 227,1 - m/z 181,0 para carbidopa (padrão interno). As curvas de calibração foram lineares na faixa de 50 a 4000 ng/mL para 3-O-metildopa. A metodologia apresentou boa precisão e exatidão de acordo com os critérios para análises biomédicas e esta foi aplicada com sucesso no estudo de bioequivalência de duas formulações contendo levodopa + benserazida (200 + 50 mg) em amostras de plasmas humanos.