Avaliação de métodos espectrofotométricos para a determinação do teor de proteínas residuais nas preparações vacinais de Poliribosil Ribitol Fosfato (PRP)

Abstract

Pneumonia grave e meningite são doenças provocadas pela bactéria Haemophilus influenzae tipo b (Hib) que podem ser previnidas por vacinas feitas a partir do polissacarídeo capsular de Hib (poliribosil ribitol fosfato; 5-D-ribitol-(1 1)--D-ribose-3-fosfato; PRP). Na purificação do PRP, os principais contaminantes (ácidos nucleicos, proteínas e endotoxinas) são removidos seletivamente obtendo-se um produto de alta imunogenicidade. O clássico método de Lowry tem sido utilizado para quantificação de proteínas no PRP, porém tem demonstrado ser inadequado para o baixíssimo nível de impurezas encontrado. Este trabalho buscou um método mais sensível e foi aplicado a três lotes experimentais de PRP de BioManguinhos/Fiocruz, comparando-se ao método de Lowry, métodos espectrofotométricos Peterson e Smith no intervalo de 2,5 a 15 µg mL-1. Os resultados obtidos indicaram a superioridade do método de Peterson, com sensibilidade de 0,0096 µg.mL-1, precisão com CV% de 5,0 a 6,9%, acurácia de 97%, limites de detecção de 0,1 µg.mL-1 e limite de quantificação de 0,5 µg.mL-1. Pelo método Lowry foi obtida sensibilidade de 0,0039 µg.mL-1 e o CV% na quantificação foi 3,8% enquanto com o método de Smith obteve-se CV% de 18 a 48% e sensibilidade de 0,0026 µg.mL-1 , não obstante, devido à necessidade de incubação a 60ºC, este último demonstrou ser inadequado para quantificação das amostras de PRP que não são estáveis a esta temperatura. Além das vantagens citadas, o método de Peterson contribuiu na redução de resíduos químicos e na redução do tempo de análise.