Investigação de diversos biomarcadores em uma linhagem celular diferenciada em macrófagos para o desenvolvimento de um ensaio de potência alternativa para vacina atenuada contra dengue

Abstract

Neste presente trabalho buscamos investigar biomarcadores em uma linhagem celular diferenciada em macrófagos para um modelo in vitro de infecção pelo vírus Dengue 2 (DENV-2) com a finalidade de desenvolver um método alternativo para avaliar a potência de vacinas de vírus atenuados, como a vacina da dengue. Para tal, utilizamos a linhagem celular monocítica THP-1, diferenciada em macrófagos (moTHP-1), que foram infectados com DENV-2, além da vacina comercial atenuada Dengvaxia®, que contém os quatro sorotipos da Dengue. As moTHP-1 foram estimuladas com IFN-y/LPS e IL-4/IL-13 para polarização nos perfis de macrófagos clássico (M1) e alternativo (M2), respectivamente. Além disso, moTHP-1 não estimuladas foram infectadas com diferentes diluições tanto com o DENV-2 quanto com a vacina comercial contra a Dengue. Para avaliar os perfis M1 e M2 usamos os marcadores de superfície CD86 e TLR2, além de medir a concentração de Óxido Nítrico (NO), através da dosagem de nitrito. Observamos que as células diferenciadas para o perfil M2 apresentaram uma menor mediana de intensidade de fluorescência (M.I.F.) de TLR2 quando comparadas com o perfil M1. As moTHP-1 infectadas com o vírus DENV-2 ou com a vacina apresentaram alteração nas moléculas de superfície (CD86 e TLR2) utilizadas, indicando que tanto o vírus quanto a vacina foram capazes de modular esses receptores, quando comparadas com as moTHP-1 estimuladas com IFN-γ/LPS ou IL-4/IL-13. Observamos que as moTHP-1 infectadas com o vírus DENV-2 ou com a vacina apresentaram diferenças na expressão dos efetores antivirais investigados neste trabalho (OAS1-3, RNase L, MxA e EIF2αK2). Verificamos também a possibilidade dessas proteínas (OAS1-3, RNase L, MxA e EIF2αK2) e dos receptores de superfície (TLR2 e CD86) serem usados como biomarcadores para um ensaio de potência alternativo para vacinas de vírus atenuados e apontamos o TLR2 como possível candidato, pois este apresentou o melhor padrão de linearidade.