Otimização do processo de obtenção do conjugado IgGperoxidase do kit diagnóstico EIE Leishmaniose Visceral Canina

Abstract

A leishmaniose visceral (LV) causada pelo parasito Leishamania chagasi é uma doença severa que se tornou um crescente problema de saúde pública em vários países, inclusive no Brasil. O diagnóstico de leishmaniose visceral canina (LVC) é muito importante no controle da doença, ao passo de evitar a eutanásia desnecessária de cães e a transmissão para os seres humanos. Atualmente o Ministério da Saúde (MS) preconiza o uso do ensaio imunoenzimático (EIE), como o teste confirmatório para leishmaniose visceral canina. Os kits EIE LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA para o diagnóstico imunoenzimático indireto produzidos por Bio-Manguinhos utilizam imunoglobulina (Ig) de cabra anti-cão conjugada com peroxidase (HRP). Embora apresente melhor leitura e interpretação dos resultados quando comparado a outros testes sorológicos disponíveis comercialmente, este estudo visa otimizar os processos de conjugação a fim de tornar os resultados mais específicos, reprodutíveis e sensíveis, já que é produzido antes da produção do kit final. Foram produzidos quatro grupos de conjugados variando a estequiometria entre a IgG e HRP, o uso de técnica de purificação dos insumos e alteração do tempo reacional. Os conjugados produzidos foram avaliados por Cromatografia de por exclusão de tamanho (SEC) e por Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Os resultados mostraram uma melhor performance para os conjugados em que a imunoglobulina foi previamente purificada (forma monomérica) e utilizando a estequiometria de 0,2 moles de IgG:1 mol de HRP. Obtivemos bom resultado também diminuindo o tempo reacional, em relação ao conjugado utilizado atualmente. Conclui-se que a otimização do processo de conjugação entre a imunoglobulina e a peroxidase é essencial para melhorar a qualidade dos kits EIE LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA de Bio-Manguinhos