Identificação, susceptibilidade antimicrobiana e identificação filogenética de Escherichia coli isoladas de queijo minas frescal

Abstract

A descoberta dos antibióticos e a sua utilização em terapia anti-infecciosa constituiu um progresso inquestionável da medicina do século XX. No entanto, a eficácia dos agentes antibacterianos foi rapidamente superada pela capacidade que as bactérias têm de se oporem à sua ação. Estas podem adquirir resistência aos antibióticos, quer pela modificação do seu genoma por mutação, quer por incorporação dos genes provenientes de outros microrganismos por diferentes sistemas de transferência genética. O uso intensivo de agentes antimicrobianos em animais para uso alimentar contribuiu para o surgimento e disseminação de bactérias resistentes nos seres humanos, em especial cepas de E. coli com diversos fenótipos resistentes aos antibióticos. O objetivo deste estudo foi o isolamento, identificação, avaliação da sensibilidade a antimicrobianos, pesquisa de genes de resistência e caracterização filogenética de estirpes de Escherichia coli isoladas de queijo Minas Frescal. Foram avaliadas trinta amostras de queijo Minas Frescal e todas apresentaram contaminação por E.coli. Foram então avaliados trinta isolados de E.coli através do Teste de Sensibilidade Antimicrobiana para dezessete agentes antimicrobianos e quinze isolados (50%) apresentaram resistência a uma ou mais classes de antimicrobianos. Os isolados que apresentaram resistência fenotípica foram também examinados quanto a presença de 24 genes de resistência antimicrobiana através de Reação em Cadeia e Polimerase (PCR) e PCR Multiplex, e todos amplificaram para um ou mais genes de resistência. A presença dos genes intI1, intI2, intI3 e as regiões variáveis dos integrons de classe 1 e de classe 2 foram examinados através de PCR. Um dos isolados analisados foi positivo para o integron de classe 1 e para o integron de classe I variável, um segundo isolado amplificou para o integron de classe 2, 3 e também para o intergron de classe II variável. Outros quatro isolados amplificaram apenas para o integron de classe I variável e um último isolado para o integron de classe 3. Para o estudo filogenético os trinta isolados de E.coli foram avaliados para verificar se pertenciam a um dos 8 filogrupos já conhecidos: A, B1, B2, C, D, E, F e o clado I. Nenhum dos isolados amplificou para nenhum dos 4 genes descritos na PCR quadruplex, quando isso ocorre o próprio estudo de referência indica que deve ser realizada a PCR para clados crípticos a fim de identificar se esses isolados são pertencentes a algum dos cinco clados crípticos existentes. O resultado foi negativo para os cinco clados crípticos avaliados, sendo assim, não foi possível a caracterização filogenética dos isolados de E.coli.