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Title: Determinação de 1-Etil-3-(3dimetilaminopropil)carbodiimida (EDAC), por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial, em PSTT (polissacarídeo de hib conjugado com proteína tetânica) utilizado na formulação da vacina contra hib produzida em Biomanguinhos
Advisor: Leandro, Kátia Christina
Members of the board: Spisso, Bernardete Ferraz
Slana, Glaucia Barbosa Candido Alves
Silva, Filipe Soares Quirino da
Leandro, Kátia Christina
Albert, André Luís Mazzei
Authors: Bastos, Leonardo Santos
Coadvisor: Albert, André Luís Mazzei
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract: A evolução das civilizações e a busca da melhoria da saúde caminham lado a lado. Das doenças que assolaram o Brasil e o mundo durante os séculos XIX e XX, as infecções bacterianas invasivas figuram entre as principais. O Haemophilus influenzae tipo b (Hib), uma bactéria patogênica, se caracteriza como uma das bactérias mais importantes neste contexto, chegando a causar 30% dos casos de pneumonia e de 20 a 60% dos casos de meningite bacteriana nos países em desenvolvimento. A doença causada por Hib pode ser prevenida através da imunização da população com a vacina conjugada polissacarídeo-proteína. Bio-Manguinhos utiliza o método da carbodiimida, que se baseia no uso do 1-Etil-3-(3dimetilaminopropil)carbodiimida (EDAC) para realizar a conjugação do Poliribosil-Ribitol-Fosfato (PRP) de Hib com a Proteína Monomérica Tetânica (PMT) formando o conjugado Tetânico de Hib (PSTT). O presente estudo apresenta o desenvolvimento de uma nova metodologia para determinação do EDAC em PSTT, utilizando a técnica de cromatografia líquida de ultraeficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial. Esse novo método permitiu a quantificação do EDAC no PSTT em nível de picograma (10-12 g), além de uma redução no tempo de análise e no fluxo de fase móvel em relação ao método anterior, que faz uso da Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) acoplada ao detector de UV e que possui limite de detecção de 10-9 g/mL. A avaliação dos dados analíticos produziu resultados que garantem a confiabilidade do método permitindo que o mesmo seja posteriormente validado e empregado no controle de qualidade do produto intermediário PSTT realizado pelo Laboratório Físico-Químico, do Departamento de Controle de Qualidade de Bio-Manguinhos.
Abstract: The evolution of civilizations and the pursuit of improved health walk side by side. Within the diseases that afflicted Brazil and the world during 19th and 20th centuries, the invasive bacterial infections are among the main ones. Haemophilus Influenzae b (Hib), a pathogenic bacteria, is characterized as one of the main causes of such infections, being responsible for up to 30% of pneumonia cases and 20-60% of bacterial meningitis cases in developing countries. The disease caused by Hib may be prevented by immunization of poputation with the polysaccharide-protein conjugated vaccine. Bio-Manguinhos employs the carbodiimide method, which is based on the use of 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC) to bind Hib’s polyribosylribitol phosphate (PRP) to tetanic monomeric protein (TMP), yielding the Hib tetanic conjugate (PSTT). This work presents the development of a new methodology to determine EDC in PSTT, using the technique ultra-performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry. This new method allowed the quantitation of EDC in PSTT in pictogram (10-12 g) level, besides a reduction in assay time and in mobile phase flow when compared to the former method, which is based on High Performance Liquid Chromatography (HPLC) coupled to a UV detector, with a detection limit of 10-9 g/mL. The evaluation of analytical data generated results that guarantee method reliability, allowing it to be further validated and used in the quality control of the intermediate product PSTT by the Physicochemical Laboratory of BioManguinhos the Quality Control Department.
Keywords: EDC
Mass Spectrometry
Hib
Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC)
Health Surveillance
Quality Control
keywords: EDAC
Espectrometria de Massas
Hib
Cromatografia Líquida de Ultraeficiência (CLUE)
Vigilância Sanitária
Controle de Qualidade
DeCS: Espectrometria de Massas
Haemophilus influenzae tipo b
Vigilância Sanitária
Controle de Qualidade
Vacinas Anti-Haemophilus
Cromatografia Líquida
Issue Date: 2015
Citation: BASTOS, L. S. Determinação de 1-Etil-3-(3dimetilaminopropil)carbodiimida (EDAC), por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial, em PSTT (polissacarídeo de hib conjugado com proteína tetânica) utilizado na formulação da vacina contra hib produzida em Biomanguinhos. 2015. 86 f. Dissertação (Mestrado em Vigilância Sanitária)-Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2015.
Date of defense: 2015-07-10
Place of defense: Rio de Janeiro/RJ
Department: Coordenação de Pós Graduação
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde
Program: Programa de Pós-Graduação em Vigilância Sanitária
Copyright: open access
Appears in Collections:INCQS - Dissertações de Mestrado

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