Determinação de 1-Etil-3-(3dimetilaminopropil)carbodiimida (EDAC), por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial, em PSTT (polissacarídeo de hib conjugado com proteína tetânica) utilizado na formulação da vacina contra hib produzida em Biomanguinhos

Abstract

A evolução das civilizações e a busca da melhoria da saúde caminham lado a lado. Das doenças que assolaram o Brasil e o mundo durante os séculos XIX e XX, as infecções bacterianas invasivas figuram entre as principais. O Haemophilus influenzae tipo b (Hib), uma bactéria patogênica, se caracteriza como uma das bactérias mais importantes neste contexto, chegando a causar 30% dos casos de pneumonia e de 20 a 60% dos casos de meningite bacteriana nos países em desenvolvimento. A doença causada por Hib pode ser prevenida através da imunização da população com a vacina conjugada polissacarídeo-proteína. Bio-Manguinhos utiliza o método da carbodiimida, que se baseia no uso do 1-Etil-3-(3dimetilaminopropil)carbodiimida (EDAC) para realizar a conjugação do Poliribosil-Ribitol-Fosfato (PRP) de Hib com a Proteína Monomérica Tetânica (PMT) formando o conjugado Tetânico de Hib (PSTT). O presente estudo apresenta o desenvolvimento de uma nova metodologia para determinação do EDAC em PSTT, utilizando a técnica de cromatografia líquida de ultraeficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial. Esse novo método permitiu a quantificação do EDAC no PSTT em nível de picograma (10-12 g), além de uma redução no tempo de análise e no fluxo de fase móvel em relação ao método anterior, que faz uso da Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) acoplada ao detector de UV e que possui limite de detecção de 10-9 g/mL. A avaliação dos dados analíticos produziu resultados que garantem a confiabilidade do método permitindo que o mesmo seja posteriormente validado e empregado no controle de qualidade do produto intermediário PSTT realizado pelo Laboratório Físico-Químico, do Departamento de Controle de Qualidade de Bio-Manguinhos.