Estudo para determinação de metodologia analítica para comprovação da eficácia antimicrobiana do álcool etílico na forma de gel

Abstract

A Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa) publicou em 20 de fevereiro de 2002 a RDC nº 46, determinando que o álcool etílico com graduações superiores a 54º GL ou 46º INPM, deveria ser comercializado unicamente em solução coloidal, na forma de gel e desnaturado. Porém organizações internacionais ainda não dispõem de metodologia padronizada para avaliação da atividade antimicrobiana destes produtos, principalmente devido a fatores interferentes como a volatilidade e a viscosidade do gel. Portanto o presente estudo teve como objetivo principal determinar uma metodologia que pudesse avaliar esta atividade. Foi realizada uma adaptação da metodologia preconizada pela “Association of Official Analytical Chemists” utilizada para avaliação da atividade antimicrobiana de desinfetantes nas formas de “Spray” e Aerossol, onde lamínulas de vidro são utilizadas como carreadores. As adaptações realizadas se mostraram bastante satisfatórias, permitindo que fosse testado um produto à base de álcool etílico sob a forma de gel (produto B), aplicando-se diferentes volumes do mesmo. O volume de 100 L do produto B (63º GL) foi capaz de eliminar Salmonela choleraesuis ATCC 10708, Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442 e Staphylococcus aureus ATCC 6538. Porém, quando o volume foi reduzido para 50 L foi verificada a eficácia apenas contra S. choleraesuis ATCC 10708 e P. aeruginosa ATCC 15442 e não para S. aureus ATCC 6538. A partir destes resultados foi estabelecido o volume mínimo de 100 μL a ser usado no método para qualquer produto. Porém, para garantir resultados confiáveis, foi realizado um estudo de pré-validação da metodologia desenvolvida, visando a validação do método e sua ampla utilização por diferentes laboratórios analíticos. A princípio foram avaliados apenas os seguintes parâmetros: especificidade, robustez e repetitividade. O método foi considerado robusto, de acordo com os parâmetros avaliados (instrumentos laboratoriais e o tempo de incubação do microrganismo), após aplicação da técnica de “pour-plate” e do teste estatístico ANOVA com nível de significância de 5% (p < 0,05). Os resultados estatísticos mostraram que não houve diferença entre os grupos estudados pela ANOVA, variando-se os instrumentos laboratoriais e o tempo de incubação. O método foi considerado robusto, pois manteve sua resposta em meio às variações deliberadas, dos parâmetros analíticos, dentro do laboratório. Após os ensaios envolvendo alguns parâmetros de validação, o método desenvolvido foi utilizado para avaliação da atividade bactericida de produtos à base de álcool etílico na forma de gel em diferentes concentrações dispostos à venda. Os produtos C (77º GL), D (77º GL) e E (82º GL), apresentaram eficácia contra todos os microrganismos teste utilizados. No entanto, o produto A (54º GL), apresentou crescimento de S. aureus ATCC 6538 muito acima do critério determinado pelo método. Para concluir o processo de validação do método, ainda será necessário realizar um estudo interlaboratorial envolvendo pelo menos três diferentes laboratórios analíticos.