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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/56255
OTIMIZAÇÃO DA MULTIPLEX PCR E A SUA UTILIZAÇÃO NA DETECÇÃO DE ESCHERICHIA COLI DIARREIOGÊNICA EM ALFACE (LACTUCA SATIVA)
Reação em Cadeia da Polimerase
Alimentos
Microbiologia de Alimentos
Alface
Lemos, Anderson Almeida de | Date Issued:
2005
Alternative title
Optimization of multiplex PCR protocol and its utilization in detection of diarrheagenic E. coli in lettuce (Lactiva sativa)Author
Advisor
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Programa de Pós-Graduação em Vigilância Sanitária. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
As doenças de origem alimentar, causadas por microorganismos, revelam um grande e crescente problema na saúde pública. A ocorrência de casos envolvendo a Escherichia coli diarreiogênicas em alimentos e bebidas, ilustra a necessidade de minimizar a exposição da população a essas cepas pelo monitoramento destas com métodos analíticos rápidos, precisos, específicos e eficazes. No presente estudo um protocolo de Multiplex PCR foi desenvolvido para a detecção de cinco grupos de E. coli diarreiogênica. Na otimização desta técnica foram utilizados cinco cepas de referência, cada uma pertencendo a um grupo (EPEC, ETEC, EHEC, EAEC e EIEC). Os genes alvos selecionados para cada categoria foram: eae para EPEC; eae e stx para EHEC; elt e es't para ETEC; ipaH para EIEC; aggR para EAEC. A M-PCR desenvolvida demonstrou ser uma técnica de reprodutibilidade intralaboratorial e com um bom limite de detecção. O protocolo de M-PCR otimizado foi aplicado em amostras de alfaces (Lactuca sativa) minimamente processadas para detecção de E. coli diarreiogênica, sem o isolamento de cepas bacterianas. Foram analisadas 24 amostras, cada amostra foi representada por duas repetições. Portanto, das 48 repetições analisadas, 12 foram positivas para cepa ETEC e uma repetição foi positiva para a cepa EPEC, ou seja, em 24 amostras, 11 deram resultados positivos (seis amostras não- orgânicas e cinco amostras orgânicas). Os resultados deste estudo mostraram que houve contaminação na alface orgânica minimamente processada com E. coli diarreiogênicas, mas em igual proporção quando comparada com a alface convencional, indicando que o risco de se ingerir este patógeno é o mesmo tanto para o cultivo orgânico quanto para o cultivo convencional.(AU)
Keywords in Portuguese
Escherichia coliReação em Cadeia da Polimerase
Alimentos
Microbiologia de Alimentos
Alface
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